Login for students

Login for employees

Publication detail

Determination of branched-chain amino acids by HPLC with fluorescence detection
Authors: Kanďár Roman | Žáková Pavla | Sladká Michaela | Kovařík Jakub | Skalický Jiří
Year: 2008
Type of publication: článek ve sborníku
Name of source: Program a sborník sympozia FONS 2008
Publisher name: Stapro s.r.o.
Place: Pardubice
Page from-to: 92-93
Titles:
Language Name Abstract Keywords
cze Stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem pomocí HPLC s fluorescenční detekcí Úvod. Stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem (valinu, leucinu a isoleucinu), methioninu, fenylalaninu a tyrosinu je v současnosti nejlepším přístupem k diagnostice choroby javorového sirupu, hypermethioninémie, fenylketonurie a tyrosinémie. Cíl. Cílem této studie bylo vyvinout jednoduchou HPLC metodu pro stanovení Val, Leu, Ile, Met, Phe a Tyr v plazmě dobrovolných dárců krve a krevní skvrně novorozenců. Metody. Byla vyvinuta HPLC metoda pro stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem, Met, Phe a Tyr v plazmě a plné krvi. Vzorky krve, s přídavkem EDTA jako antikoagulační činidlo, byly získány od dobrovolných dárců krve (n = 70, 35 žen ve věku 27-41 let s průměrem 37 let a 35 mužů ve věku 28-43 let s průměrem 38 let). Plazma byla odseparována od krevních buněk pomocí centrifugace (1 700 x g, 15 minut, 8 °C) a poté uchována při ?80 °C. Vzorky krve novorozenců (n = 80, 40 holčiček a 40 chlapečků, ve věku 3 ? 5 dnů) byly odebrány na #903 speciální filtrační papír a nechány schnout nejméně 24 hodin před vlastním měřením. Krevní skvrny byly bezprostředně použity k měření nebo uchovávány při 4 °C. Před HPLC analýzou byly aminokyseliny derivatizovány s o-ftalaldehydem. Pro separaci byla použita kolona LiChroCart 125-4 Purospher RP-18e, 5 um. Efluent byl monitorován pomocí fluorescenčního detektoru. Jako mobilní fáze A byla použita směs 25 mmol/l Na2HPO4-methanol (90:10, v/v), pH 6,5?0,1, mobilní fáze B byl 100% methanol. Výsledky. Analytické parametry metody byly uspokojivé. Variační koeficienty přesnosti v sérii byly pro Val, Leu, Ile, Met, Phe a Tyr v krevní skvrně 3,64%, 3,86%, 2,75%, 3,76%, 2,41% a 5,11% (n = 10) a plazmě 1,38%, 2,22%, 1,36%, 2,77%, 1,65% a 1,78% (n = 10). Variační koeficienty přesnosti mezi sériemi byly 8,31%, 7,22%, 5,91%, 6,11%, 6,94% a 5,97% (n = 12) pro krevní skvrnu, 7,26%, 6,38%, 5,36%, 6,89%, 5,37% a 6,38% (n = 12) pro plazmu. Výtěžnosti byly následující: 101,50% (CV 2,99%), 101,50% (CV 3,45%), 105,75% (CV 1,82%), 105,73% (CV 1,40%), Aminokyseliny s rozvětveným řetězcem, Choroba javorového sirupu, fenylketonurie, HPLC s fluorescenční detekcí
eng Determination of branched-chain amino acids by HPLC with fluorescence detection Background. The determination of branched-chain amino acids (valine, leucine and isoleucine), methionine, phenylalanine and tyrosine is presently the most reliable direct approach to the diagnosis of maple syrup urine disease (MSUD), hypermethioninemia, phenylketonuria (PKU) and tyrosinemia. Aim. The aim of this study was to develop rapid and simple HPLC method for measurement Val, Leu, Ile, Met, Phe and Tyr in plasma of blood donors and dried blood of newborns. Subject and methods. A HPLC method for measurement of branched-chain amino acids, Met, Phe and Tyr in plasma and whole blood has been developed and evaluated. Samples of peripheral venous blood with EDTA as anticoagulant were obtained from a group of healthy blood donors (n = 70, 35 women in the age 27-41 years, mean age 37 years and 35 men in the age 28 43 years, mean age 38 years). Plasma was separated from blood cells by centrifugation (1 700 x g, 15 min, 8 °C) and immediately stored at ?80 °C. Blood-spot samples from a group of newborns (n = 80, 40 baby girls and 40 baby boys, in the age 3 ? 5 days) were collected onto #903 Specimen Collection Paper and allowed to dry for at least 24 h before measurement of the branched-chain keto acids. Spots were immediately used or stored at 4 °C. Before the separation, the amino acids were derivatized with o phthaldialdehyde. For the separation, reverse phase column LiChroCart 125 4 Purospher RP 18e, 5 um, was used. Efluent was monitored with fluorescence detector. The mixture 25 mmol/l Na2HPO4 ? methanol (90:10, v/v), pH 6.5?0.1 was used as mobile phase A and 100% methanol was used as mobile phase B. Results. The analytical performance of this method is satisfactory for determination of all amino acids. The intra assay coefficients of variation for Val, Leu, Ile, Met, Phe and Tyr were 2.64%, 3.86%, 2.75%, 3.67%, 2.41% and 5.11% (n = 10) for dried blood samples, 1.38%, 2.22%, 1.36%, 2.77%, 1.65% and 1.78% (n = 10) for plasma. The inter-assay coefficients of variat Branched-chain amino acids;Maple syrup urine disease;Phenylketonuria;HPLC with fluorescence detection

Departments

Other Parts

Map

en.mapy.cz

Services

Popular Links

© 2023 University of Pardubice, Studentská 95, 532 10 Pardubice 2
Phone: +420 466 036 111, 466 036 112, 466 036 113
Webmaster, RSS
Data box ID: f5vj9hu
Accessibility Statement
CC BY-NC-ND 4.0Creative CommonsAttributionNonCommercialNoDerivatives