Publication detail

Determination of reduced and oxidized glutathione in biological samples using liquid chromatography with fluorimetric detection

Authors: Kanďár Roman | Žáková Pavla | Lotková Halka | Kučera Otto | Červinková Zuzana

Year: 2007

Type of publication: článek v odborném periodiku

Name of source: Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis

Publisher name: Pergamon-Elsevier Science Ltd.

Place: Oxford

Page from-to: 1382-1387

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Stanovení redukovaného a oxidovaného glutathionu v biologických vzorcích pomocí kapalinové chromatografie s fluorescenční detekcí	Byla zavedena metoda pro stanovení oxidovaného (GSH) a redukovaného (GSSG) glutathionu v plazmě, plné krvi a hepatocytech potkanů. Redukovaný glutathion reaguje při pH kolem 8 s orthoftalaldehydem (OPA) za vzniku vysoce fluoreskujícího tricyklického derivátu, zatímco GSSG reaguje s OPA při pH 12. Při stanovení GSSG, musí být GSH navázán do komplexu s N-ethylmaleimidem. Pro separaci jsme zvolili jako stacionární fázi chromatografickou kolonu Discovery C18, 150 mm x 4 mm, 5 um, mobilní fází byla směs methanolu a 25 mmol/l hydrogenfosforečnanu sodného (15:85, v/v), pH 6,0. Analytické parametry této metody jsou vyhovující jak pro GSH, tak také pro GSSG. Přesnost v sérii, vyjádřena variačním koeficientem, byla pro plnou krev 1,8% a 2,1%, pro potkaní hepatocyty 2,0 a 1,9% a pro plazmu 4,3 a 5,2%. Přesnost mezi sériemi, vyjádřená variačním koeficientem, byla pro plnou krev 5,8 a 6,2%, pro potkaní hepatocyty 6,6 a 7,1% a pro plazmu 6,9 a 7,8%. Výtěžnosti metody byly následující: 98,2% (CV 3,5%) a 101,5% (CV 4,2%) pro plnou krev, 99,1% (CV 2,5%) a 102,3% (CV 4,4%) pro potkaní hepatocyty a 94,1% (CV 7,5%) a 103,5% (CV 8,5%) pro plazmu. Kalibrační křivka byla lineární v celém testovaném rozmezí. Detekční limit byl 14,0 a 5,6 fmol. Předběžné referenční hodnoty redukovaného a oxidovaného glutathionu se u skupiny dobrovolných dárců krve pohybovaly v rozmezí (4,69 +/- 0,93) a (0,28 +/- 0,12) umol/g Hb v plné krvi, (1,82 +/- 0,55) a (0,154 +/- 0,044) umol/l v plazmě.	redukovaný a oxidovaný glutathion; kapalinová chromatografie s fluorescenční detekcí; ortoftalaldehyd; N-ethylmaleimid
eng	Determination of reduced and oxidized glutathione in biological samples using liquid chromatography with fluorimetric detection	A HPLC method for determination of both reduced (GSH) and oxidized (GSSG) glutathione in plasma, whole blood and rat hepatocytes has been developed and evaluated. Reduced glutathione reacts with orthophthaldehyde (OPA) to form a stable, highly fluorescent tricyclic derivate at pH 8, while GSSG reacts with OPA at pH 12. At measurement of GSSG, GSH was complexed to N-ethylmaleimide. For the separation, reverse phase column Discovery C18, 150 mm × 4 mm, 5 um, was used. The mixture of methanol and 25 mM sodium hydrogenphosphate (15:85, v/v), pH 6.0, was used as mobile phase. The analytical performance of this method is satisfactory for both GSH and GSSG. The intra-assay coefficients of variation were 1.8 and 2.1% for whole blood, 2.0 and 1.9% for rat hepatocytes, 4.3 and 5.2% for plasma. The inter-assay coefficients of variation were 5.8 and 6.2% for whole blood, 6.6 and 7.1% for rat hepatocytes, 6.9 and 7.8% for plasma. The recoveries were as follows: 98.2% (CV 3.5%) and 101.5% (CV 4.2%) for whole blood, 99.1% (CV 2.5%) and 102.3% (CV 4.4%) for rat hepatocytes, 94.1% (CV 7.5%) and 103.5 (CV 8.5%) for plasma. The calibration curve was linear in the whole range tested. The limit of detection was 14.0 and 5.6 fmol, respectively. The preliminary reference ranges of reduced and oxidized glutathione in a group of blood donors are (4.69 +/- 0.93) and (0.28 +/- 0.12) umol/g Hb for whole blood, (1.82 +/- 0.55) and (0.154 +/- 0.044) uM for plasma.	reduced and oxidized glutathione; liquid chromatography with fluorescence detection; orthophthaldehyde; 4-ethylmaleimide

Search

Login for students

Login for employees

Publication detail

Departments

Other Parts

Map

Services

Popular Links