Publication detail

Determination of both reduced and oxidised glutathione using liquid chromatography with fluorimetric detection

Authors: Kanďár Roman | Žáková Pavla | Richter Michal

Year: 2005

Type of publication: článek ve sborníku

Name of source: Clinica Chimica Acta

Publisher name: Elsevier Science BV

Place: Amsterdam

Page from-to: 220

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Stanovení redukovaného a oxidovaného glutathionu pomocí kapalinové chromatografie s fluorimetrickou detekcí	Vyvinuli jsme metodu pro stanovení redukovaného i oxidovaného glutathionu v plazmě, erytrocytech a hepatocytech. Redukovaný glutathion (GSH) reaguje při pH 8 s orthoftalaldehydem (OPA) za vzniku stabilního a vysoce fluoreskujícího tricyklického derivátu, zatímco oxidovaný gltathion (GSSG) reaguje s OPA při pH 12. Při stanovení GSSG byl GSH maskován N-ethylmaleimidem. Pro separaci jsme jako stacionární fázi použili chromatografickou kolonu Discovery C18, 150 x 4 mm, 5 um. Jako mobilní fáze byla použita směs methanolu a 25 mmol/l fosfátového pufru (15:85, v/v), pH 6,00. Bylo dosaženo znamenité výtěžnosti. Variační koeficient pro přesnost v sérii byl 3,8% a pro přesnost mezi sériemi 5,2%. Výtěžnost metody byla mezi 95 a 105% a mez detekce byl 0,1 pmol derivátu. Vyvinuli jsme vysoce selektivní, citlivou a rychlou metodu pro stanovení redukovaného a oxidovaného glutathionu v biologických vzorcích.	glutathione; HPLC
eng	Determination of both reduced and oxidised glutathione using liquid chromatography with fluorimetric detection	A method for measurement of both reduced (GSH) and oxidized (GSSG) glutathione in plasma, erythrocytes and hepatocytes has been developed and evaluated. Reduced glutathione reacts with orthophthaldehyde (OPA) to form a stable, highly fluorescent tricyclic derivate at pH 8, while GSSG reacts with OPA at pH 12. At measurement of GSSG, GSH was complexed to N-ethylmaleimide. For the separation, reverse phase column Discovery C18, 150 x 4 mm, 5 um, was used. The mixture of methanol and 25 mmol/l phosphate buffer (15:85, v/v), pH 6.00, was used as mobile phase. Excellent linearity was achieved. The intra- and inter-assay coefficient of variation was 3.8% and 5.2%, respectively. The recovery was 95-105%, and limit of detection was 0.1 pmol of glutathione adduct. We have developed highly selective, sensitivite and rapid method for measurement of both GSH and GSSG in biological samples.	glutathion; HPLC

Search

Login for students

Login for employees

Publication detail

Departments

Other Parts

Map

Services

Popular Links