Login for students

Login for employees

Publication detail

An HPLC method for the determination of selected amino acids in human embryo culture medium
Authors: Drábková Petra | Andrlová Lenka | Kanďár Roman
Year: 2017
Type of publication: článek v odborném periodiku
Name of source: Biomedical Chromatography
Publisher name: John Wiley & Sons Ltd.
Place: Chichester
Page from-to: "e3800-1"-"e3800-11"
Titles:
Language Name Abstract Keywords
cze HPLC metoda pro stanovení vybraných aminokyselin v kultivačním médiu pro kultivaci lidských embryí Je zde popsána metoda pro stanovení vybraných aminokyselin v kultivačním médiu metodou HPLC s fluorescenční detekcí. Dvacet čtyři hodin po intracytoplazmatické injekci spermií byla náhodně vybraná zygota přenesena do kultivačního média. Po inkubaci (72 h po oplození) bylo kultivační médium, ve kterém bylo inkubováno embryo, a médium, ve kterém embryo nebylo inkubováno (slepý vzorek) bezprostředně zamraženo při -80 °C. Aminokyseliny v přefiltrovaném vzorku média byly derivatizovány ortho-ftalaldehydem (naftalen-2,3-dikarboxaldehydem) za vzniku vysoce fluoreskujících derivátů aminokyselin. Pro separaci derivátů aminokyselin byly použity kolony s vázanou reverzní fází (LichroCART, Purospher STAR RP-18e nebo Ascentis Express C18). Deriváty byly z kolony eluovány mobilní fází obsahující ethanol a dihydrogenfosforečnan sodný v gradientovém módu. Analytické parametry metody byly vyhovující pro všechny stanovované aminokyseliny: variační koeficienty přesnosti v sérii byly <10 % a výtěžnosti se pohybovaly v rozmezí 95,5–104,4 %. Hladiny vybraných aminokyselin se před a po inkubaci lidského embrya lišily. Po inkubaci některých lidských embryí byly hladiny všech sledovaných aminokyselin zvýšeny, vyjma aspartátu a asparaginu. Po kultivaci některých embryích byly v médiu detekovány aminokyseliny, které nejsou součástí kultivačního média. U některých embryí byl pozorován nízký obrat aminokyselin. aminokyseliny; HPLC s fluorescenční detekcí; kultivační médium pro kultivaci lidských embryí; naftalen-2,3-dikarboxaldehyd, ortho-ftalaldehyd
eng An HPLC method for the determination of selected amino acids in human embryo culture medium A method for the determination of selected amino acids in culture medium using HPLC with fluorescence detection is described. Twenty hours after intra-cytoplasmic sperm injection, one randomly selected zygote was transferred to the culture medium. After incubation (72 h after fertilization), the culture medium in which the embryo was incubated and blank medium was immediately stored at -80°C. Filtered medium samples were derivatized with ortho-phthalaldehyde (naphthalene-2,3-dicarboxaldehyde), forming highly fluorescent amino acids derivatives. Reverse-phase columns (LichroCART, Purospher STAR RP-18e or Ascentis Express C18) were used for the separation. The derivatives were analyzed by gradient elution with a mobile phase containing ethanol and sodium dihydrogen phosphate. The analytical performance of this method is satisfactory for all amino acids; the intra-assay coefficients of variation were <10% and quantitative recoveries were between 95.5 and 104.4%. Changes in the levels of selected amino acids before and after human embryo cultivation were observed. After embryo incubation, the levels of all amino acids in the medium were increased, apart from aspartate and asparagine. After the cultivation of some embryos, amino acids which were not part of the medium were detected. Low amino acids turnover was observed in some embryos. amino acids; HPLC with fluorescence detection; human embryo culture medium; naphthalene-2,3-dicarboxaldehyde; ortho-phthalaldehyde

Departments

Other Parts

Map

en.mapy.cz

Services

Popular Links

© 2023 University of Pardubice, Studentská 95, 532 10 Pardubice 2
Phone: +420 466 036 111, 466 036 112, 466 036 113
Webmaster, RSS
Data box ID: f5vj9hu
Accessibility Statement
CC BY-NC-ND 4.0Creative CommonsAttributionNonCommercialNoDerivatives