University of PardubiceFaculty of Chemical Technology

University

Employees
|
Students
Česky

Publication detail

Kometová metoda jako nástroj pro testování genotoxicity nanomateriálů

Authors: Majtnerová Pavlína | Báčová Jana | Macák Jan | Roušar Tomáš

Year: 2020

Type of publication: ostatní - přednáška nebo poster

Page from-to: nestránkováno

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Kometová metoda jako nástroj pro testování genotoxicity nanomateriálů	Kometová metoda patří mezi molekulárně-biologické metody a využívá se především k testování potencionální genotoxicity biologických nebo chemických agens, včetně nanomateriálů. Vlivem těchto faktorů může docházet k poškození DNA a vzniku tzv. DNA zlomů, které jsme schopni pomocí Kometové metody detekovat. Detekce probíhá na úrovni jednotlivých buněk, kdy jsou buňky nejprve fixovány na mikroskopickém podložním skle v agarózovém gelu a následně lyzovány. DNA je poté vystavena vysokému pH, aby došlo k rozvolnění nadšroubovicového vinutí a je elektroforeticky rozdělena, kdy využíváme její přirozeně záporný náboj. Rychlost migrace DNA je pak závislá na počtu vzniklých DNA zlomů. Výsledkem elektroforetického dělení jednotlivých buněk s poškozenou DNA je charakteristický tvar připomínající kometu. V rámci naší studie jsme otestovali pomocí Kometové metody působení modelových nanomateriálů různého tvaru i původu na lidské plicní buněčné linii A549 pocházející z alveolárního adenokarcinomu. Nanomateriály jsou často využívány jako tkáňové nosiče pro buněčný růst, poskytují vhodné prostředí pro dělení a proliferaci buněk, tudíž se předpokládá jejich nulová nebo zanedbatelná cytotoxicita. Otestovali jsme komerčně dostupné nanočástice TiO2 P25 (Sigma-Aldrich), či de novo připravená nanovlákna TiO2 a SiO2. Jako pozitivní kontrola byl využit terciální butylhydroperoxid, který způsobuje oxidační poškození buněk.	Kometová; metoda; nanomateriál; A549