Publication detail

A New Sensitive Method for the Detection of Mycoplasmas Using Fluorescence Microscopy

Year: 2019

Type of publication: článek v odborném periodiku

Name of source: Cells

Publisher name: MDPI

Place: BASEL

Page from-to: 1510

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Nová citlivá metoda k detekci mykoplazmat využívající fluorescenční mikroskopii	Kontaminace buněčných kultur mykoplazmaty je velmi častým jevem. Mykoplazmata mohou podstatně změnit buněčný metabolismus a potenciálně se rozšířit do všech buněčných kultur v laboratoři, a proto je nutná jejich včasná detekce. Jedna z nejrychlejších a nejlevnějších metod detekce mykoplazmat závisí na přímém barvení DNA mykoplazmat barvivy DAPI nebo Hoechst. Ačkoli je tato metoda snadno a rychle proveditelná, ve srovnání s jadernou DNA trpí nízkým signálem poskytovaným těmito barvivy. Proto se reportérové buněčné linie používají pro kultivaci mykoplazmat před krokem barvení DAPI nebo Hoechst. V předložené studii jsme vyvinuli a otestovali nový imunofluorescenční test pro detekci mykoplazmat. Metoda je založena na enzymatickém značení pomocí DNA polymerázy I a modifikovaných nukleotidů. Modifikované nukleotidy jsou inkorporovány do DNA mykoplazmat a následně vizualizovány imunofluorescenční mikroskopií. Vyvinutý přístup je nezávislý na druhu, nebarví intenzivně nukleární DNA, nebarví jiné bakterie a poskytuje vyšší citlivost než přístup založený na přímém značení barvivy DAPI nebo Hoechst.	buněčné kultury; mykoplazmové infekce; imunofluorescenční detekce
eng	A New Sensitive Method for the Detection of Mycoplasmas Using Fluorescence Microscopy	Contamination of cell cultures by mycoplasmas is a very common phenomenon. As they can substantially alter cell metabolism and potentially spread to all cell cultures in laboratory, their early detection is necessary. One of the fastest and cheapest methods of mycoplasma detection relies on the direct staining of mycoplasmas’ DNA by DAPI or Hoechst dyes. Although this method is easy and fast to perform, it suffers from the low signal provided by these dyes compared to the nuclear DNA. Therefore, the reporter cell lines are used for cultivation of mycoplasmas before DAPI or the Hoechst staining step. In the study presented, we have developed and tested a new immunofluorescence assay for the detection of mycoplasmas. The method is based on the enzymatic labeling using DNA polymerase I and modified nucleotides utilizing nicks in the mycoplasmas’ DNA. Modified nucleotides are incorporated into mycoplasmas’ DNA and subsequently visualized by immunofluorescence microscopy. The developed approach is independent of the mycoplasma strain, does not intensely stain nuclear DNA, does not stain other bacteria, and provides higher sensitivity than the approach based on the direct labeling using DAPI or Hoechst dyes.	cell cultures; mycoplasma infection; immunofluorescence detection

Search

Login for students

Login for employees

Publication detail

Departments

Other Parts

Map

Services

Popular Links