Publication detail

Simple and Reproducible Derivatization with Benzoyl Chloride: Improvement of Sensitivity for Multiple Lipid Classes in RP-UHPLC/MS

Year: 2021

Type of publication: článek v odborném periodiku

Name of source: Analytical Chemistry

Publisher name: American Chemical Society

Place: Washington

Page from-to: 13835-13843

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Jednoduchá a reprodukovatelná derivatizace benzoylchloridem: Zlepšení citlivosti pro více lipidových tříd v RP-UHPLC/MS	Chemická derivatizace několika lipidových tříd byla vyvinuta za použití benzoylchloridu jako nerizikového derivatizačního činidla za okolních podmínek. Procedura derivatizace byla optimalizována standardy pro 4 nepolární a 8 polárních lipidových tříd a měřena ultra-vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s reverzní fází spojenou s tandemovou hmotnostní spektrometrií. Přístupy derivatizace a nonderivatizace byly porovnávány na základě kalibračních křivek 22 vnitřních standardů z 12 lipidových tříd. Nová metoda snížila detekční limit 9krát u monoacylglycerolů (0,9-1,0 nmol/ml), 6,5krát pro sfingoidní bázi (0,2 nmol/ml) a 3krát pro diacylglyceroly (0,9 nmol/ml). Citlivost vyjádřená poměrem kalibračních sklonů byla u téměř všech zkoumaných lipidových tříd zvýšena 2krát až 10krát a u monoacylglycerolů dokonce více než 100krát. Navíc benzoylační reakce vytváří stabilnější derivát cholesterolu ve srovnání se snadno zdrojově fragmentovatelnou nonderivatizovanou formou a umožnila detekci mastných kyselin v pozitivním iontovém režimu, který nevyžaduje přepínání polarity jako u nonderivatizované formy. Intralaboratorní srovnání s dalším operátorem bez předchozích zkušeností s derivatizací ukazuje jednoduchost, robustnost a reprodukovatelnost. Stabilita derivátů byla stanovena pravidelným měřením během jednoho měsíce a pěti cykly zmrazení/tání. Optimalizovaná derivatizační metoda byla aplikována na lidskou plazmu, ve které bylo možno detekovat 169 lipidů z 11 lipidových tříd pomocí vysoké úrovně spolehlivosti identifikace v reverzní fázi (RP)-ultra vysokoúčinné kapalinové chromatografie (UHPLC)/hmotnostní spektrometrie (MS). Obecně jsme zjistili více lipidových druhů pro monoacylglyceroly, diacylglyceroly a sfingoidní báze ve srovnání s dříve publikovanými články bez derivatizace.	vysokoúčinná kapalinová chromatografie; hmotnostní spektrometrie, relativní kvantifikace; vysoká propustnost; fosfolipidy; zlepšení; cholesterol; platforma; nemoc; krev
eng	Simple and Reproducible Derivatization with Benzoyl Chloride: Improvement of Sensitivity for Multiple Lipid Classes in RP-UHPLC/MS	The chemical derivatization of multiple lipid classes was developed using benzoyl chloride as a nonhazardous derivatization agent at ambient conditions. The derivatization procedure was optimized with standards for 4 nonpolar and 8 polar lipid classes and measured by reversed-phase ultrahighperformance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The derivatization and nonderivatization approaches were compared on the basis of the calibration curves of 22 internal standards from 12 lipid classes. The new method decreased the limit of detection 9-fold for monoacylglycerols (0.9-1.0 nmol/mL), 6.5-fold for sphingoid base (0.2 nmol/mL), and 3-fold for diacylglycerols (0.9 nmol/mL). The sensitivity expressed by the ratio of calibration slopes was increased 2- to 10-fold for almost all investigated lipid classes and even more than 100-fold for monoacylglycerols. Moreover, the benzoylation reaction produces a more stable derivative of cholesterol in comparison to the easily in-source fragmented nonderivatized form and enabled the detection of fatty acids in a positive ion mode, which does not require polarity switching as for the nonderivatized form. The intralaboratory comparison with an additional operator without previous derivatization experiences shows the simplicity, robustness, and reproducibility. The stability of the derivatives was determined by periodical measurements during a one month period and five freeze/thaw cycles. The fully optimized derivatization method was applied to human plasma, which allows the detection of 169 lipid species from 11 lipid classes using the high confidence level of identification in reversed-phase (RP)-ultra high performance liquid chromatography (UHPLC)/mass spectrometry (MS). Generally, we detected more lipid species for monoacylglycerols, diacylglycerols, and sphingoid bases in comparison with previously reported papers without the derivatization.	performance liquid-chromatography; mass-spectrometry; relative quantification; high-throughput; phospholipids; enhancement; cholesterol; platform; disease; blood

Search

Login for students

Login for employees

Publication detail

Departments

Other Parts

Map

Services

Popular Links