University of Pardubice Faculty of Chemical Technology

University

Employees
|
Students
Česky

Publication detail

RP-UHPLC/MS charakterizace lidské plazmy pomocí benzoylace více lipidových tříd

Authors: Peterka Ondřej | Jirásko Robert | Vaňková Zuzana | Chocholoušková Michaela | Wolrab Denise | Holčapek Michal

Year: 2021

Type of publication: ostatní - přednáška nebo poster

Page from-to: nestránkováno

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	RP-UHPLC/MS charakterizace lidské plazmy pomocí benzoylace více lipidových tříd	Chemická derivatizace lipidových funkčních skupin může zlepšit účinnost extrakce, chromatografické oddělení a citlivost. Benzoylchlorid je bezpečná derivatizační látka s vysokou reaktivitou pro několik funkčních skupin produkujících estery s hydroxylovou skupinou, amid s aminoskupinou a anhydrid s karboxylovou skupinou. Reakční stav, jako je objem a poměr činidel, reakční doba a teplota, byly důkladně optimalizovány pomocí dávkované směsné plazmy. Nejlepší výtěžek poskytuje molární poměr 4:1 pyridinu (335 μL) a benzoylchloridu a reakční doba 60 minut při okolní teplotě. Reprodukovatelnost reakce zkoumali 2 operátoři s hlášenou RSD nižší než 20 %. Reakční, retenční a fragmentační chování bylo zkoumáno u 4 nepolárních a 8 polárních lipidových tříd a produkty byly charakterizovány MS a MS/MS s využitím hmotnostní spektrometrie s vysokým rozlišením (ca. 30 000). Stabilita derivátů byla stanovena pravidelným měřením během jednoho měsíce a pěti cykly zmrazení/tání, vzorky byly uloženy při teplotě -80 °C. Přístupy derivatizace a bez derivatizace byly porovnávány pomocí kalibračních křivek 22 vnitřních standardů z 12 lipidových tříd (včetně nereaktivního fosfatidylcholinu jako kontroly kvality). Citlivost byla zvýšena 2 až 10násobně u téměř všech zkoumaných lipidových tříd a dokonce více než 100násobně u monoacylglycerolů. Lidská plazma byla charakterizována metodou ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie s reverzní fází spojenou s hmotnostní spektrometrií využívající vysokou úroveň spolehlivosti identifikace (hmotnostní přesnost, MS/MS spektra a závislosti retenčního času). Celkem bylo identifikováno 169 derivatizovaných lipidových druhů reprezentujících 11 lipidových tříd a derivatizační metoda umožňuje detekovat více lipidů monoacylglycerolů, diacylglycerolů a sfingoidních bází ve srovnání s přístupy bez derivatizace.