Publication detail

Optimization of Gradient Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography Analysis of Acetaminophen Oxidation Metabolites using Linear and Non-linear Retention Model

Year: 2022

Type of publication: článek v odborném periodiku

Name of source: Journal of Chromatography A

Page from-to: 462956

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Optimalizace gradientové HPLC analýzy oxidačních metabolitů acetaminofenu v systému s obrácenými fázemi s použitím lineárního a nelineárního retenčního modelu	Paracetamol (APAP) je jedním z celosvětově nejpoužívanějších léků. Bohužel jeho předávkování, které je způsobeno převažující oxidací APAP, může vést k akutnímu poškození jater. V játrech je oxidovaný APAP konjugován s glutathionem, což vede ke konjugátu APAP-glutathion, který je metabolizován na konjugáty APAP-cystein a APAP-N-acetylcystein. Všechny tyto sloučeniny by tedy mohly být použity ke sledování metabolismu APAP u předávkovaných pacientů. Doposud byl popsán pouze omezený počet rychlých a přesných metod pro hodnocení oxidačních metabolitů APAP s využitím jednoduchého přístrojového vybavení, a proto byla tato práce zaměřena na vývoj rychlé a pohodlné gradientové HPLC-UV/MS metody. Za tímto účelem byly syntetizovány konjugáty APAP s glutathionem, cysteinem a N-acetylcysteinem, přečištěny preparativní kapalinovou chromatografií a charakterizovány pomocí NMR a hmotnostní spektrometrie s vysokým rozlišením. Podmínky gradientové eluce byly optimalizovány pomocí metody okenního diagramu a vliv složení mobilní fáze a aditiv na separaci a citlivost detekce byl vyhodnocen pomocí dvou, tj. lineárního a nelineárního isokratického retenčního modelu. Kvantitativní parametry vyvinuté metody byly vyhodnoceny a účinnost, citlivost a specifičnost metody byly prokázány na analýze buněčných lyzátů lidských ledvin HK-2, což potvrdilo vhodnost metody pro rutinní použití ve studiích toxicity APAP.	acetaminofen;S-konjugáty acetaminofenu;metabolity;gradientová eluce;optimalizace;isokratický retenční model;okénkový diagram
eng	Optimization of Gradient Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography Analysis of Acetaminophen Oxidation Metabolites using Linear and Non-linear Retention Model	Acetaminophen (paracetamol, APAP) is one of the most widely used drugs worldwide. Unfortunately, its overdose, which is caused by predominant oxidation of APAP, can lead to acute liver injury. In liver, oxidized APAP is conjugated with glutathione, leading to APAP-glutathione conjugate, which is metabolized to APAP-cysteine and APAP-N-acetylcysteine conjugates. Thus, all of those compounds could be used to monitor APAP metabolism in the overdosed patients. To date, only a limited number of rapid and accurate methods have been reported for the assessment of APAP oxidation metabolites using simple instrumentation, and thus this work was aimed at developing a fast and convenient gradient HPLC-UV/MS method. For this purpose, APAP conjugates with glutathione, cysteine, and N-acetylcysteine were synthesized, purified by preparative liquid chromatography, and characterized by NMR and high-resolution mass spectrometry. The gradient elution conditions were optimized using the window diagram approach and the effects of mobile phase composition and additives on separation and detection sensitivity were evaluated using two, i.e., linear and non-linear isocratic retention models. Quantitative parameters of the developed method were evaluated and the effectiveness, sensitivity, and specificity of the method were demonstrated on the analysis of human kidney HK-2 cell lysates, confirming the suitability of the method for routine use in studies on APAP toxicity.	acetaminophen;acetaminophen-S-conjugates;metabolites;gradient elution;optimization;isocratic retention models;window diagram

Search

Login for students

Login for employees

Publication detail

Departments

Other Parts

Map

Services

Popular Links