University of PardubiceFaculty of Chemical Technology

University

Employees
|
Students
Česky

Publication detail

Lipidomická charakteristika lidské plazmy pomocí reverzní fáze UHPLC/MS: Srovnání QTOF s vysokým rozlišením a QTRAP se SRM přechody

Authors: Vaňková Zuzana | Peterka Ondřej | Idkowiak Jakub | Jirásko Robert | Holčapek Michal

Year: 2022

Type of publication: ostatní - přednáška nebo poster

Page from-to: nestránkováno

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Lipidomická charakteristika lidské plazmy pomocí reverzní fáze UHPLC/MS: Srovnání QTOF s vysokým rozlišením a QTRAP se SRM přechody	Lipidomika se zaměřuje na studium lipidů, jejich struktur a funkcí v biologických systémech. Změny lipidových profilů byly zjištěny u několika onemocnění, včetně diabetu mellitu, rakoviny, kardiovaskulárních chorob atd. Lipidomika se opírá o chromatografii a hmotnostní spektrometrii, protože tyto přístupy nabízejí vysokou citlivost a kapacitu. Nejběžnější metodou je ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie s reverzní fází (RP-UHPLC). Lipidy se separují podle polarity, délky mastného acyl/alkylového řetězce, počtu a pozice dvojných vazeb. Cílem této práce bylo vyvinout metodu RP-UHPLC/MS k implementaci správné a vysoce přesné identifikace velkého počtu lipidových druhů z různých tříd ve vzorcích lidské plazmy. Pro detekci byly použity dva různé analyzátory hmotnosti: QTOF s vysokým rozlišením, který poskytuje vysokou přesnost hmotnosti, a analyzátor QTrap s vyšší citlivostí. Analýza QTOF byla založena na vysoké hmotnostní přesnosti hodnot m/z naměřených v obou režimech polarity ESI, tak i ve specifické fragmentaci MS/MS. V MRM režimu na QTrapu byly použity specifické přechody jednotlivých molekul. Podařilo se nám identifikovat více než 500 lipidových druhů z 26 tříd lipidů pro konfiguraci s QTOF a přes 600 lipidových druhů z 28 tříd lipidů pro konfiguraci s QTrap. Z našich výsledků vyplývá, že kvantifikace lipidů v režimu MRM vede k vyššímu počtu identifikovaných druhů lipidů a zvyšuje jistotu identifikace díky vícenásobným přechodům pro jednu lipidovou strukturu. Retenční chování jednotlivých homologních lipidových sérií bylo navíc ověřeno pomocí grafů závislosti retenčních časů na uhlíkovém čísle nebo počtu dvojných vazeb v tukových acylových řetězcích.	lipidomika; reverzní fáze; identifikace
eng	Lipidomic Characterization of Human Plasma Using Reversed-Phase UHPLC/MS: Comparison of High-Resolution QTOF and QTRAP with SRM Approaches	Lipidomics focuses on studying lipids, their structures, and functions in the biological systems. Alterations in lipid profiles have been reported in several diseases, including diabetes mellitus, cancer, cardiovascular disease, etc. Lipidomics relies on chromatography and mass spectrometry because these approaches offer high sensitivity and capacity. The most common method is reversed-phase ultrahigh-performance liquid chromatography (RP-UHPLC). The lipids are separated according to the polarity, the length of the fatty acyl/alkyl chain, the number and position of double bonds. This work aimed to develop the RP-UHPLC/MS method to implement the correct and highly accurate identification of a large number of lipid species from different classes in human plasma samples. Two different mass analyzers have been used for the detection: a high-resolution quadrupole – time-of-flight (QTOF) mass analyzer, which provides high mass accuracy, and low-resolution QTrap mass analyzer with higher sensitivity. The analysis on QTOF was based on the high mass accuracy of m/z values measured in both polarity modes of ESI and specific MS/MS fragmentation. The multiple reaction monitoring (MRM) mode on QTrap used specific transitions of individual molecules. We were able to identify more than 500 lipid species from 26 lipid classes for QTOF configuration, and over 600 lipid species from 28 lipid classes for QTrap configuration. Our results indicate that the lipid quantitation using MRM mode leads to a higher number of identified lipid species and increases the certainty of identification because of multiple transitions for one lipid structure. In addition, the retention behavior of individual homologous lipid series was verified using graphs of dependences of retention times on the carbon number or the number of double bond(s) in fatty acyl chains.	Lipidomics; reversed-phase; identification