University of Pardubice Faculty of Chemical Technology

University

Employees
|
Students
Česky

Publication detail

Chemická derivatizace lipidů: Interní standard pro každý analyt

Authors: Peterka Ondřej | Jirásko Robert | Vaňková Zuzana | Idkowiak Jakub | Holčapek Michal

Year: 2022

Type of publication: ostatní - přednáška nebo poster

Page from-to: nestránkováno

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Chemická derivatizace lipidů: Interní standard pro každý analyt	Chemická derivatizace lipidových funkčních skupin může zlepšit extrakční účinnost, chromatografickou separaci a citlivost. Benzoylchlorid není nebezpečný derivát a má vysokou reaktivitu pro několik funkčních skupin produkujících estery s hydroxylovou skupinou, amidy s aminoskupinou a anhydridy s karboxylovou skupinou. Benzoylační metoda zvýšila citlivost 2 až 10násobně u téměř všech zkoumaných tříd lipidů a dokonce více než 100násobně u monoacylglycerolů v porovnání s nederivatizačním přístupem. Navíc pomáhá ke snadnější identifikaci a přesné kvantifikaci pomocí H/D, což znamená mísení neznačených derivátů (H) a značených derivátů (D) ve stejném poměru. Kapalinová chromatografie s reverzní fází umožňuje řešit izomerní lipidy, jako je level acylů lipidů a acylových pozic na skeletu glycerolu, ale pro přesnou kvantifikaci je třeba použít velké množství vnitřních standardů. Naše derivatizační metoda vytváří vnitřní standard pro každý odvozený lipid a koeluci analytu a standardu (ΔRT ± 0,1 min), která zajišťuje stejný matricový efekt a ionizační účinnost. Značené deriváty se používají jako směs vnitřních standardů, vytvářející identický lipidomický profil a odpovídající koncentraci pro všechny analyty. Vytvořené dublety v hmotnostním spektru se známým Δm/z usnadňují identifikaci a přinášejí další parametr pro vysokou úroveň spolehlivosti identifikace. Metoda byla validována a použita pro cílenou kvantitativní analýzu a byly zkoumány lipidomické rozdíly mezi zdravými kontrolními pacienty a pacienty s nádorovým onemocněním.	Derivatizace; lipidy; interní standard
eng	Chemical derivatization of lipids: Internal standard per each analyte	Chemical derivatization of lipid functional groups can improve extraction efficiency, chromatographic separation, and sensitivity. Benzoyl chloride is a non-hazardous derivatization agent with high reactivity for several functional groups producing esters with the hydroxyl group, amides with the amino group, and anhydrides with the carboxylic group. The benzoylation method increased the sensitivity 2 to 10-fold for almost all investigated lipid classes and even more than 100-fold for monoacylglycerols compared to the non-derivatization approach. Moreover, it helps to easier identification and accurate quantitation using H/D pooling, which means the mixing of non-labelled derivatives (H) and labelled derivatives (D) in the same ratio. Reversed-phase liquid chromatography enables to resolve isomeric lipids, such as the fatty acyl level and fatty acyl positions on the glycerol skeleton, but for accurate quantitation must be used a large number of internal standards. Our derivatization method creates an internal standard per each derivatized lipid and coelution of analyte and standard (ΔRT ± 0.1 min), ensuring the same matrix effect and ionization efficiency. Labeled derivatives are used as an internal standard mixture, producing the identical lipidomic profile and corresponding concentration for all analytes. The created doublets in the mass spectrum with known Δm/z facilitate identification and bring the next parameter for a high confidence level of the identification. The method was validated and used for targeted quantitative analysis and lipidomic differences between healthy controls and cancer patients were investigated.	Derivatization; lipids; internal standard