University of Pardubice Faculty of Chemical Technology

University

Employees
|
Students
Česky

Publication detail

Metodika s ověřenými vlastnostmi - Preanalytická kontrola kvality vzorků

Authors: Holčapek Michal | Chocholoušková Michaela | Idkowiak Jakub | Jirásko Robert | Peterka Ondřej | Vaňková Zuzana | Wolrab Denise

Year: 2021

Type of publication: ostatní do riv

Page from-to: nestránkováno

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Metodika s ověřenými vlastnostmi - Preanalytická kontrola kvality vzorků	Vyvinuli jsme preanalytickou kontrolu kvality vzorků (vzorků lidské plazmy) ve spolupráci s Veřejnou vysokou školou v Singapuru - Výzkumný ústav v Singapuru, skupina prof. Markuse Wenka. Pro testování a vývoj této metody jsme měli celkem 40 vzorků od 4 ženských a 4 mužských zdravých dobrovolníků. Do zkumavek K3 EDTA o objemu 4 ml bylo současně odebráno 5 plných zkumavek krve od každého zdravého dobrovolníka, ale další zpracování vzorku, například centrifugace s následným oddělením plazmy od krevních buněk, pokračovalo u každé zkumavky v různém čase. Po odběru krve byly zkumavky plné krve udržovány při pokojové teplotě po dobu 0h, 1h, 2h, 4h a 10h před centrifugací následovanou oddělením plazmy a zmrazením při -80 °C. Časový bod 0h znamená, že centrifugace a separace plazmy byla provedena během několika minut po odběru krve. Metoda je založena na analýze lipidových podtříd, jako jsou ceramidy (Cer), sfingomyeliny (SM), gangliosidy (GM), acylkarnitiny, hexosylceramidy (Hex(n)Cer, n = 1-4) a sfingoidní báze-1-fosfát (S1P). Kvantifikace zkoumaných lipidů byla založena na kapalinové chromatografii ve spojení s hmotnostní spektrometrií (LC/MS) využívající trojitý kvadrupól v pozitivním iontovém režimu používající skeny vybraných iontových reakcí (SRM). Pro analýzu S1P byla použita metoda hydrofilní kapalinové chromatografie (HILIC), zbytek lipidů byl analyzován kapalinovou chromatografií na reverzní fázi (RP-LC). Vzorky byly randomizovány pro extrakci a pro měření. Kontrola kvality připravená ze všech vzorků byla použita pro sledování signálu během měření.	Kontrola kvality; Lidská plazma; Lipidy; Hmotnostní spektrometrie
eng	Methodology with proven characteristics - Preanalytical control of sample quality	We have developed a preanalytical control of a quality of samples (human plasma samples) with a cooperation of National University of Singapore, Singapore Lipidomics Incubator, prof. Markus Wenk group. For a testing and developing of this method, we had 40 samples from 4 female and 4 male healthy volunteers in total. 5 tubes of whole blood from each healthy volunteer were collected into 4 mL K3 EDTA tubes at the same time, but further sample processing, such as centrifugation with subsequent separation of plasma from blood cells, was continued within different time for each tube. After blood collection, tubes with whole blood were kept at room temperature for 0h, 1h, 2h, 4h, and 10h before centrifugation followed by separation of plasma and freezing at -80°C. Time point 0h means that centrifugation and separation of plasma was performed within a few minutes after the blood collection.The method is based on the analysis of lipid subclasses, such as ceramides (Cer), sphingomyelins (SM), gangliosides (GM), acylcarnitines, hexosyl ceramides (HexnCer, n=1-4), and sphingoid base 1-prosphate (S1P). The quantitation of studied lipids was based on liquid chromatography - mass spectrometry (LC/MS) using triple quadrupole in positive ion mode using selected reaction monitoring (SRM) scans. Hydrophilic liquid chromatography (HILIC) method was used for the analysis of S1P, the rest of lipid species was analyzed by reverse-phase liquid chromatography (RP-LC). Samples were randomized for extractions and for measurements. Quality control prepared from all samples was used for monitoring of signal during measurements.	Quality control; Human plasma; Lipids; Mass spectrometry