University of Pardubice Faculty of Chemical Technology

University

Employees
|
Students
Česky

Publication detail

SEPARACE SFINGOLIPIDŮ A ROZLIŠOVÁNÍ JEJICH ISOMERNÍCH TŘÍD V LIDSKÉ PLAZMĚ A BUNĚČNÝCH LINIÍCH POMOCÍ HILIC/MS

Authors: Kolářová Denisa | Peterka Ondřej | Jirásko Robert | Holčapek Michal

Year: 2023

Type of publication: ostatní - přednáška nebo poster

Page from-to: nestránkováno

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	SEPARACE SFINGOLIPIDŮ A ROZLIŠOVÁNÍ JEJICH ISOMERNÍCH TŘÍD V LIDSKÉ PLAZMĚ A BUNĚČNÝCH LINIÍCH POMOCÍ HILIC/MS	Lipidy jsou biologicky aktivní látky, které se nacházejí ve všech eukaryotických buňkách a hrají významnou roli v buněčné signalizaci, tvorbě membrán a mechanismech ukládání energie1. Soubor lipidů uvnitř buňky se nazývá lipidom a zahrnuje tisíce jednotlivých lipidů. Dysregulace lipidů může souviset se závažnými onemocněními, jako je například rakovina2. Sfingolipidy (SP) jsou běžně detekovány v lipidových extraktech z biologických vzorků. Tyto lipidy se obvykle nacházejí v buněčných membránách, což jsou mechanicky stabilní a chemicky rezistentní dvojvrstvy složené převážně z fosfolipidů a okolních prokaryotických nebo eukaryotických buněk. V současné době je zaznamenána alterace metabolismu SP u pacientů s nádorovými onemocněními, což vede k rostoucí popularitě jejich analýzy. Primární technikou analýzy lipidů je hmotnostní spektrometrie, která ve spojení se separačními metodami umožňuje stanovení velkého počtu lipidů z různých lipidových kategorií. V rámci naší práce byla vyvinuta HILIC/MS metoda pro identifikaci a kvantifikaci rozmanitého spektra SP ve vzorcích lidské plazmy a buněčných liniích. Z lidské plazmy byly SP izolovány a extrahovány pomocí směsi ethanol-voda, následované čištěním na C18 kolonkách s pevnou fází, z buněčných linií podle modifikovaného Folchova postupu, kde byla oddělována organická fáze3,4. Pro optimalizaci chromatografických podmínek jsme zohlednili výběr kolony, složení mobilních fází, gradient, průtok mobilních fází a koncentraci pufru, abychom dosáhli nejlepšího možného chromatografického rozlišení. Nejvyšší rozlišení bylo dosaženo pomocí kolony Acquity UPLC BEH HILIC (150 x 2.1 mm; 1.7 μm). Zvláštní důraz byl kladen na rozlišení izomerních tříd, jako například glukosylceramidy od galaktosylceramidů a laktosylceramidy od digalaktosylceramidů. Díky optimalizované metodě jsme byli schopni identifikovat více než 100 sfingolipidů z 11 lipidových tříd v plazmě i buněčných liniích. Identifikace byla založena na jejich retenčním čase, vysok