University of PardubiceFaculty of Chemical Technology

University

Employees
|
Students
Česky

Publication detail

Comprehensive Analysis of Nonpolar Lipids in Human Plasma and Serum Samples using RP-UHPSFC/MS

Authors: Šubrtová Veronika | Lásko Zuzana | Peterka Ondřej | Jirásko Robert | Holčapek Michal

Year: 2024

Type of publication: ostatní - přednáška nebo poster

Page from-to: nestránkováno

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Komplexní analýza nepolárních lipidů ve vzorcích plazmy a séra pomocí RP-UHPSFC/MS	Nepolární lipidy tvoří skupinu důležitých biomolekul, které jsou klíčové pro výrobu a skladování energie ve všech buňkách. Do této skupiny lze zařadit acylglyceroly, steroly (ST) a sterol estery (SE). Každý z těchto lipidů také hraje významnou roli v buněčné homeostáze, nicméně význam jednotlivých lipidů v těchto procesech není dosud přesně znám. Tyto látky jsou sice hojně zastoupeny v lidské plazmě/séru, ale i přesto je jejich analýza komplikovaná, a to z mnoha důvodů, zejména pak kvůli velkému množství izomerů. Proto jsou zapotřebí vysokoúčinné separační metody, které umožní jednotlivé izomery rozlišit. Vzhledem ke komplexnosti biologických vzorků je analýza lipidů založená zejména na hmotnostní spektrometrii (MS) ve spojení s předřazenou separační technikou. Velmi výhodnou kombinací pro analýzu nepolárních lipidů je ultra-vysokoúčinná superkritická fluidní chromatografie v systému s obrácenými fázemi (RP UHPSFC), kterou lze snadno kombinovat s ionizací elektrosprejem. UHPSFC technika umožňuje dva separační přístupy v lipidomické analýze. Prvním přístupem je separace dle lipidových tříd (separace podobná HILIC módu), která primárně dělí lipidy na základě polární skupiny, což vede ke koeluci lipidů z jedné třídy do jednoho chromatografického píků. Tento přístup je výhodný zejména pro kvantitativní analýzu. Druhým přístupem je separace jednotlivých druhů lipidů (separace podobná chromatografii v systémech s obrácenými fázemi (RP) u kapalinové chromatografie), která separuje jednotlivé lipidy na základě délky mastného acylového řetězce a počtu dvojných vazeb, což umožňuje i separaci izomerů s odlišnými polohami dvojné vazby. Hlavním cílem této práce bylo vyvinout a zoptimalizovat RP-UHPSFC/MS metodu pro analýzu nepolárních lipidů, jmenovitě mastných kyselin (FA), ST, SE a mono- (MG), di- (DG) a tri-acylglycerolů (TG) ve vzorcích plazmy a séra. Kromě separačních a ionizačních podmínek byly optimalizovány i extrakční protokoly, kde byla jako nejvhodnější zvolena selek	Lipidomika; Plazma; Sérum; RP-UHPSFC/MS
eng	Comprehensive Analysis of Nonpolar Lipids in Human Plasma and Serum Samples using RP-UHPSFC/MS	Nonpolar lipids are a group of important biomolecules that are crucial for the production and storage of energy in all cells. This group includes acylglycerols, sterols (ST) and sterol esters (SE). Each of these lipids also plays an important role in cellular homeostasis, however, the importance of individual lipids in these processes is not yet precisely known. Although these substances are abundantly represented in human plasma/serum, their analysis is nevertheless complicated, for many reasons, especially due to the large number of isomers. Therefore, high-performance separation methods are needed that allow the individual isomers to be distinguished. Due to the complexity of biological samples, lipid analysis is mainly based on mass spectrometry (MS) in conjunction with a preliminary separation technique. A very advantageous combination for the analysis of nonpolar lipids is ultra-high-performance supercritical fluid chromatography in a reversed-phase system (RP UHPSFC), which can be easily combined with electrospray ionization. The UHPSFC technique enables two separation approaches in lipidomics analysis. The first approach is lipid class separation (a separation similar to the HILIC mode), which primarily separates lipids based on polar groups, leading to the co-elution of lipids from one class into one chromatographic peak. This approach is particularly advantageous for quantitative analysis. The second approach is lipid species separation (a separation similar to reversed-phase (RP) chromatography in liquid chromatography), which separates individual lipids based on the length of the fatty acyl chain and the number of double bonds, allowing for the separation of isomers with different double bond positions. The main objective of this work was to develop and optimize an RP-UHPSFC/MS method for the analysis of non-polar lipids, namely fatty acids (FA), ST, SE and mono- (MG), di- (DG) and tri-acylglycerols (TG) in plasma and serum samples. In addition to the s	Lipidomics; Human Plasma and Serum; RP-UHPSFC/MS