Login for students

Login for employees

Publication detail

Electrophoretic separation of amyloid beta peptides
Authors: Zdražilová Pavla | Holub Dušan | Bílková Zuzana
Year: 2007
Type of publication: článek ve sborníku
Name of source: Amino Acids
Publisher name: Springer
Page from-to: LII
Titles:
Language Name Abstract Keywords
cze Elektroforetická separace beta amyloidových peptidů Hlavní proteinovou součástí amyloidových plaků nacházených v mozcích pacientů s Alzheimerovou chorobou je peptid amyloid-β (Aβ or βA4). b-amyloidové peptidy (o molekulové hmotnosti kolem 4,5 kDa) mají přibližně 42 aminokyselinových zbytků. Ukládání a agregace těchto peptidů je považována za důležitý patologický jev pro vznik senilních plaků. Hladiny peptidů Aβ a proteinu tau v mozkomíšním moku a/nebo plasmě splňují kritéria pro spolehlivé testování intra vitam a patří mezi biomarkery podporující diagnostiku Alzheimerovy choroby. Běžně využívané systémy SDS-PAGE nejsou vhodné pro rozlišení A peptidů lišících se pouze o jeden či dva aminokyselinové zbytky v délce peptidového řetězce. Proto byly testovány i další elektroforetické techniky z hlediska jejich užitečnosti pro separaci A peptidů Aβ(1-38), Aβ(1-40) and Aβ(1-42). Základním zvoleným systémem byla Tris-Tricin SDS-PAGE, dále SDS-PAGE s ureou a kyselinou octovou (HAc) jako denaturujícími činidly. Použita byla také bicin/bis-tris/Tris/sulfátová SDS-PAG, kde je vysoká rozlišovací schopnost dosažena pomocí přidání 8M urey do separačního gelu a použitím zmíněného diskontinuálního pufru. Všechny experimenty byly prováděny s využitím systému Mini PROTEAN 3 (BioRAD) a gely byly následně barveny pomocí Coomassie Brilliant blue R-250 či technikou amoniakálního stříbra. Rozlišení jednotlivých peptidů pomocí HAc-Urea SDS-PAGE nebylo pro naše účely dostačující. Ověřili jsme, že elektroforetická separace Ab peptidů je proveditelná pomocí mulitfázové bicin/bis-tris-Tris/SDS-PAGE s gely obsahujícími 8M ureu. Všechny peptidy se rozdělily do ostrých bandů a také za těchto podmínek dokonce delší peptidy putují v gelu rychleji než peptidy o délce 38 či 40 aminokyselin. Dobré rozdělení bylo dosaženo i pomocí Tris-Tricinového systému SDS-PAGe, zde ale byly peptidové bandy mírně deformované a rozmyté. amyloid beta; SDS-PAGE; Alzheimerova choroba
eng Electrophoretic separation of amyloid beta peptides The main protein component of the amyloid deposits found in the brains of Alzheimer´s disease patients is a peptide termed amyloid-β (Aβ or βA4). The amyloid-β peptides (molecular weight about 4,5 kDa) are approximately 42-amino acid residue peptides. Peptides deposition and aggregation are thought to be important pathological events in the formation of Alzheimer´s disease plaque. The concentrations of Aβ peptides and tau protein(s) in cerebrospinal fluid and/or blood belong to the candidate biomarkers supporting diagnose of Alzheimer?s disease and they have been proven to fulfill the criteria for good diagnostic tests intra vitam. Conventional SDS-PAGE system is not suited for separating of amyloid-β peptides Aβ(1-38), Aβ(1-40) and Aβ(1-42). Alternative electrophoretic techniques have been compared for their usefulness in separation analysis of peptides corresponding to amino acids (1-38), (1-40) and (1- 42) of the amyloid-β sequence. The first system is the fundamental Tris-Tricine electrophoresis, while the second one employs acetic-urea-polyacrylamide gel electrophoresis denaturing system. We have also applied the urea version of the bicine/bis-tris/Tris/sulfate SDS-PAGE to separate Aβ peptides. Here the clear resolution was achieved by addition of 8M urea to the separation gel and use aforementioned multiphasic buffer. All electrophoreses procedures were performed using the Bio-RAD Mini PROTEAN 3 electrophoresis gel system and gels were stained using Coomassie Brilliant blue R-250 or by silver staining. The separation by means of acetic-urea-PAGE was not sufficient enough. We proved that electrophoretic separation of these peptides is practicable by the bicine/Tris/SDS-PAGE system with the separation gels containing 8M urea. Under these conditions the longer peptide migrated faster than the one ending at amino acid 38 or 40. All peptides are resolved as cleraly separated sharp bands, even on minig amyloid beta peptide; SDS-PAGE; Alzheimer´s disease

Departments

Other Parts

Map

en.mapy.cz

Services

Popular Links

© 2023 University of Pardubice, Studentská 95, 532 10 Pardubice 2
Phone: +420 466 036 111, 466 036 112, 466 036 113
Webmaster, RSS
Data box ID: f5vj9hu
Accessibility Statement
CC BY-NC-ND 4.0