Publication detail

Semisynthesis of C17:0 isoforms of sulphatide and glucosylceramide using immobilised sphingolipid ceramide N-deacylase for application in analytical mass spectrometry

Year: 2010

Type of publication: článek v odborném periodiku

Name of source: Rapid Communication in Mass Spectrometry

Publisher name: John Wiley & Sons Ltd.

Place: Chichester

Page from-to: 2393-2399

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Semisyntéza C17:0 izoform sulphatidu a glucosylceramidu pomocí imobiliované sphingolipid ceramide N-deacylasy pro aplikace v analytické hmotnostní spektrometrii	Sphingolipid ceramide N-deacylase (SCDase, EC 3.5.1.69) je hydrolytický enzym izolovaný z Psendomonas sp. TK 4. Vedle jeho primární funkce deacylázy je tento enzym schopný reacylovat lyso-sphingolipids za použití specifických reakčních podmínek. tento enzym byl imobilizován na magnetickou makroporézní celulózu a byl použit pro semisyntézu C17:0 glucosylceramidu a C17:0 sulphatidu, které jsou vyžadovány jako vnitřní standardy pro kvantifikaci odpovídajících glykosfhingolipidů (GSL) pomocí tandemové hmotnostní spektrometrie. Vysokého stupně konverze bylo dosaženo pro oba lipidy (80% pro C17:0 sulphatid a 90% pri C17:0 glukosylceramid). Ve srovnání se syntézou solubilním enzymem, použití imobilizované SCDázy výrazně omezilo kontaminaci sfingolipidových produktů jinými izoformami a nebyla nutná následná purifikace. Tato metoda může být efektivně použita pro jednoduchou přípravu specificky značených vysoce čistých izoforem sfingolipidů pro aplikaci v hmotnostní spektrometrii.	Reverzní hydrolýza; kvantitativní stanovení;vnitřní standardy; reaktory;enzym;acyl
eng	Semisynthesis of C17:0 isoforms of sulphatide and glucosylceramide using immobilised sphingolipid ceramide N-deacylase for application in analytical mass spectrometry	Sphingolipid ceramide N-deacylase (SCDase, EC 3.5.1.69) is a hydrolytic enzyme isolated from Psendomonas sp. TK 4. In addition to its primary deacylation function, this enzyme is able to reacylate lyso-sphingolipids under specific conditions. We immobilised this enzyme on magnetic macroporous cellulose and used it to semisynthesise C17:0 glucosylceramide and C17:0 sulphatide, which are required internal standards for quantification of the corresponding glycosphingolipids (GSL) by tandem mass spectrometry. A high rate of conversion was achieved for both lipids (80% for C17:0 sulphatide and 90% for C17:0 glucosylceramide). In contrast to synthesis with a soluble form of the enzyme, use of immobilised SCDase significantly reduced the contamination of the sphingolipid products with other isoforms, so further purification was not necessary. Our method can be effectively used for the simple preparation of specifically labelled sphingolipids of high isoform purity for application in mass spectrometry.	REVERSE HYDROLYSIS REACTION; QUANTITATIVE-DETERMINATION; INTERNAL STANDARDS; FABRY-DISEASE; REACTORS; ENZYME; ACYL

Search

Login for students

Login for employees

Publication detail

Departments

Other Parts

Map

Services

Popular Links