Publication detail

Využití imobilizovaných enzymů při identifikaci a charakterizaci fosforylací na proteinech

Authors: Kroupa Tomáš | Jankovičová Barbora | Hernychová Lenka | Bílková Zuzana

Year: 2011

Type of publication: ostatní - přednáška nebo poster

Page from-to: nestránkováno

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Využití imobilizovaných enzymů při identifikaci a charakterizaci fosforylací na proteinech	V této práci jsme se zaměřili na možnost využití imobilizace dvou enzymů používaných v průběhu přípravy vzorků a identifikace fosforylace, trypsin pro proteolytické štěpení proteinů a alkalickou fosfatázu, která umožňuje defosforylaci hydrolýzou vazby mezi příslušnou aminokyselinou a fosfátovou skupinou. Pro imobilizaci jsme použili postup založený na neorientované vazbě enzymů na částice s karboxylovými funkčními skupinami pomocí EDC a sulfo-NHS v prostředí fosfátového pufru. Aktivitu navázaných enzymů jsme ověřili reakcmi s příslušnými specifickými substráty, tj Nα-benzoyl-DL-arginin-4-nitroanilid hydrochorid (BAPNA) pro trypsin a p nitrofenyl fosfát pro alkalickou fosfatázu. Konečné ověření účinnosti imobilizovaných enzymů bylo provedeno pomocí modelových standardních fosfoproteinů s detekcí na hmotnostním spektrometru s MALDI ionizací.	imobilizované enzymy; fosforylace

Search