Publication detail

QUALITY EVALUATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES SUITABLE FOR IMMUNOMAGNETIC PURIFICATION OF NATIVE TAU PROTEIN

Year: 2014

Type of publication: článek v odborném periodiku

Name of source: Scientific Papers of the University of Pardubice, Series A, Faculty of Chemical Technology

Publisher name: Univerzita Pardubice

Place: Pardubice

Page from-to: 147-163

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Hodnocení kvality monoklonálních protilátek vhodných pro imunomagnetickou purifikaci nativního tau proteinu	Tau protein hraje klíčovou roli při stabilizaci cytoskeletu neuronů. Za patologických podmínek může být abnormálně fosforylován, což vede k agregaci a tvorbě neurofibrilárních klubek představujících patologický ukazatel Alzheimerovy choroby (AD). Tau protein je z důvodu spojitosti s neurodegenerativním onemocněním intenzivně studována v rámci různých diagnostických a terapeutických aplikací. Protože neexistuje standard tau proteinu, který by zahrnoval základní post-translační modifikace, je často nutné jej purifikovat přímo z mozkomíšního moku (CSF) nebo krve zdravých jedinců či jedinců vykazujících AD klinické příznaky. Imunomagnetická purifikace založená na izolaci cílového proteinu s použitím specifické protilátky navázané na magnetickém nosiči je velmi účinný nástroj pro tento účel. Hlavním předpokladem úspěšné purifikace jsou vysoce kvalitní protilátky, ale mnoho komerčních protilátek není v souladu s náročnými požadavky požadovanými pro přípravu imunosorbentu. V této práci jsme porovnávali čtyři různé anti-tau monoklonální protilátky, které jsou v současné době k dispozici na trhu (klony HT7, BT2, 8F10, 7E5). Kritéria hodnocení byla stanovena s ohledem na jejich plánované použití pro přípravu specifického magnetického immunosorbentu následně aplikovaného při purifikaci nativního tau proteinu. Ověřovali jsme vlastnosti deklarované výrobcem jako je specifita, čistota a homogenita. Navíc jsme testovali vazebnou afinitu a IgG stabilitu během kovalentní imobilizace na povrch magnetických mikročástic a při imunoprecipitaci intaktního tau proteinu popř. tau tryptických fragmentů. Výsledky jsou v práci detailně popsány a shrnuty.	Tau protein; Alzheimerova choroba; imunomagnetická purifikace; monoklonální protilátky
eng	QUALITY EVALUATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES SUITABLE FOR IMMUNOMAGNETIC PURIFICATION OF NATIVE TAU PROTEIN	Tau protein plays a crucial role in the neuronal cytoskeleton stabilization. Under the pathological conditions, it can be abnormally phosphorylated which leads to the aggregation and formation of neurofibrillary tangles representing pathological hallmark of Alzheimer’s disease (AD). For its association with neurodegenerative diseases, tau protein is intensively studied in various diagnostic and therapeutic applications. Since there is no standard of tau protein involving essential post-translational modifications, it is often necessary to purify it directly from cerebrospinal fluid (CSF) or blood of healthy or AD clinical signs exhibiting organism. The immunomagnetic purification based on the isolation of the target protein using a specific antibody bound to a magnetic carrier is the most effective tool for this purpose. High quality antibodies are the main prerequisite of successful purification, but many commercial antibodies do not comply with the challenging requirements for the immunosorbent preparation. In this work, we compared four different anti-tau monoclonal antibodies currently available on the market (clones HT7, BT2, 8F10, 7E5). The evaluation criteria were set along the intended use for the preparation of specific magnetic immunosorbent subsequently applicable for the native tau protein purification. We evaluated the characteristics declared by producers as specificity, purity and homogeneity. We also tested the binding affinity and IgG stability during the covalent immobilization to the surface of magnetic microparticles and during the immunoprecipitation of intact tau protein or tryptic tau fragments. The results are summarized and discussed here.	Tau protein; Alzheimer’s disease; immunomagnetic purification; monoclonal antibody

Search

Login for students

Login for employees

Publication detail

Departments

Other Parts

Map

Services

Popular Links