Publication detail

Vývoj magnetického imunosorbentu pro průkaz Salmonella Typhimurium pro mikrofluidní aplikace

Authors: Srbová Jana | Holubová Lucie | Krulišová Pavla | Bílková Zuzana

Year: 2015

Type of publication: ostatní - přednáška nebo poster

Page from-to: nestránkováno

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Vývoj magnetického imunosorbentu pro průkaz Salmonella Typhimurium pro mikrofluidní aplikace	Dle údajů WHO zemřou každým rokem na celém světě v důsledku alimentárních nákaz 2 miliony lidí. Z nich je zhruba 300 tisíc případů přičítáno úmrtím v důsledku salmonelových infekcí. Pozornost se proto upíná na vývoj nových zařízení pro rychlý průkaz salmonel v potravinách, v našem případě v mléce. Cílem našeho projektu bylo vyvinout novou mikrofluidní platformu založenou na imunomagnetickém záchytu Salmonella s rychlou detekcí celých buněk i jejich DNA pomocí senzoru pracujícího na principu akustických vln (SAW sensor). Stěžejním krokem pro vývoj tohoto zařízení byla příprava magnetického imunosorbentu pro specifický záchyt Salmonella Typhimurium z analyzovaného vzorku. Nejlepší výsledky byly dosaženy s 1 µm magnetickými částicemi Promag 1 Series (Bangs Labs, US) a s polyklonálními anti-Salmonella protilátkami (KPL, US) imobilizovanými na částice pomocí dvoukrokové karbodiimidové konjugační metody. Účinnost imunomagnetické separace byla hodnocena počítáním kolonií po kultivaci imunosorbentu s navázanými buňkami na masopeptonovém agaru při 37 ° C. Připravený imunosorbent byl schopný v modelovém systému ve vsádkovém uspořádání účinnosti záchytu dosahujícího 63-86 % při separaci salmonel z čisté kultury (v závislosti na koncentraci Salmonella ve vzorku 101-105 CFU/mL) a 27-86 % při separaci ze směsné kultury s 10-10 000x přebytkem E. coli vůči Salmonella. Obdobné experimenty byly úspěšně provedeny i s nabohacenými vzorky mléka (nízko-, polo- a plnotučná UHT mléka i pasterovaného mléka). I z takto komplexní matrice byly dosaženy obdobné účinnosti záchytu, dosahující až 88 %. Po důkladné charakterizaci imunosorbentu a ověření účinnosti záchytu salmonel ve vsádkovém uspořádání byly úspěšně provedeny obdobné experimenty v mikrofluidním PDMS čipu na francouzském Institutu Curie. Byla tak ověřena kompatibilita vyvinutého nosiče i použité metody s mikrofluidním uspořádáním. Posledním krokem bude specifický průkaz zachycených bakterií pomocí SAW senzoru.	Salmonella Typhimurium, imunomagnetická separace, mikrofluidním PDMS čip

Search

Login for students

Login for employees

Publication detail

Departments

Other Parts

Map

Services

Popular Links