Publication detail

Benefits of immunomagnetic separation for epitope identification in clinically important protein antigens: a case study using ovalbumin, carbonic anhydrase I and tau Protein

Year: 2015

Type of publication: článek v odborném periodiku

Name of source: Universal Journal of Biomedical Engineering

Page from-to: 1-8

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Výhody imunomagnetických separací pro epitopovou identifikaci klinicky důležitých biomarkerů: Příkladové studie na ovalbuminu, karbonické anhydráze I a Tau proteinu	Imunomagnetická separace (IMS) založená na specifické protilátce jako afinitním ligandu zakotveném na magnetickém nosiči má určité výhody ve srovnání se standardím kolonovým uspořádáním. Epitopové mapování umožňující identifikaci a charakterizaci proteinových struktur zodpovědných za interakci s protilátkou je možné provést i pomocí IMS. V práci jsme využili epitopovou extrakci založenou na proteolytickém štěpení cílového proteinu následovanou záchytem specifických peptidových fragmentů na protilátkách ukotvených na magnetickém nosiči. Zachycené specifické peptidy byly eluovány z nosiče pomocí 0,05% TFA. Eluční frakce byly následně analyzovány na hmotnostním spektrometru. Technika byla ověřena na třech klinicky významných proteinech (ovalbuminu, karobonické anhydráze a Tau proteinu).	Epitopové mapování; imunomagnetická separace; ovalbumin; karbonická anhydráza I; tau protein
eng	Benefits of immunomagnetic separation for epitope identification in clinically important protein antigens: a case study using ovalbumin, carbonic anhydrase I and tau Protein	Immunomagnetic separation (IMS) with specific antibody as affinity ligand immobilized on a magnetic carrier has several advantages in comparison with standard column separation procedures. Epitope mapping enabling identification and characterization of protein structures reactive with the antibody represents one possible application of IMS. We used epitope extraction technique based on the proteolytic digestion of the target protein followed by capturing of a specific peptide fragments by the antibody immobilized on the solid phase. Magnetic particles coated with antibody molecules were first incubated with the prepared mixture of peptides. after specific binding of peptide fragments comprising the epitope sequences, the beads were washed to remove non-epitope peptides. Captured epitope-peptides were then eluted in small volume of 0.05% TFA. Elution fractions were finally analyzed without any modification by mass spectrometry. In this work the results and experience gained in epitope mapping of three clinically important proteins (ovalbumin, carbonic anhydrase I and Tau protein) are discussed.	Epitope mapping; imunomagnetic separation; ovalbumin; carbonic anhydrase; tau protein

Search

Login for students

Login for employees

Publication detail

Departments

Other Parts

Map

Services

Popular Links