Login for students

Login for employees

Publication detail

Selektivní izolace hydrofobinu SC3 a jeho následná proteomická analýza
Authors: Zelená Miroslava | Kupčík Rudolf | Řehulka Pavel | Bílková Zuzana | Česlová Lenka
Year: 2017
Type of publication: ostatní - přednáška nebo poster
Page from-to: nestránkováno
Titles:
Language Name Abstract Keywords
cze Selektivní izolace hydrofobinu SC3 a jeho následná proteomická analýza Hydrofobiny jsou malé proteiny, obsahující typický vzor osmi cysteinů, které jsou propojené čtyřmi disulfidickými můstky. Vykazují výraznou povrchovou aktivitu a schopnost samoshluknutí na různých typech rozhraní.V této práci byla vyvinuta nová metoda pro izolaci hydrofobinu SC3 (Schizophyllum commune), využívající vysokou hydrofobicitu těchto proteinů a silnou afinitu k teflonu jako adsorpčnímu činidlu. Pomocí teflonových mikročástic byl selektivně izolován hydrofobin SC3 z modelových směsí proteinů. Tato technika je velmi efektivní, časově nenáročná a představuje velký potenciál pro izolaci hydrofobinů z reálných vzorků. Účinnost izolace hydrofobinů byla ověřena pomocí tricinové SDS-PAGE. Identifikace hydrofobinu SC3 byla provedena pomocí MALDI-MS s využitím dvou typů analyzátorů – analyzátor doby letu (TOF) a orbitální past (Orbitrap). Pro analýzu na MALDI-TOF/TOF hmotnostním spektrometru byl použit intaktní hydrofobin, ale před analýzou na peptidové úrovni pomocí MALDI-Orbitrap bylo nutné protein nejprve enzymaticky naštěpit. Na základě obsahu aminokyselin v primární struktuře analyzovaného proteinu bylo enzymatické štěpení provedeno pomocí chymotrypsinu a thermolysinu. Úspěšnost štěpení je podmíněna efektivní redukcí a alkylací disulfidických můstků, jelikož hydrofobiny jsou jimi vysoce stabilizované. Pro redukci bylo použito redukční činidlo Tris(2-karboxyethyl)fosfinhydrochlorid v kombinaci s hydrochloridem guanidinu nebo deoxycholátem sodným s následnou alkylací jodoacetamidem. Úspěšnost enzymatického štěpení byla ověřena pomocí tricinové SDS-PAGE. Vzniklé peptidy byly analyzovány pomocí MALDI-MS. hydrofobiny, hmotnostní spektrometrie, proteomická analýza

Departments

Other Parts

Map

en.mapy.cz

Services

Popular Links

© 2023 University of Pardubice, Studentská 95, 532 10 Pardubice 2
Phone: +420 466 036 111, 466 036 112, 466 036 113
Webmaster, RSS
Data box ID: f5vj9hu
Accessibility Statement
CC BY-NC-ND 4.0Creative CommonsAttributionNonCommercialNoDerivatives