Publication detail

Synthesis and proteasomal activity of novel O-benzyl salicylamide-based inhibitors built from leucine and phenylalanine

Year: 2017

Type of publication: článek v odborném periodiku

Name of source: European Journal of Medicinal Chemistry

Page from-to: 142-158

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Syntéza a proteasomální aktivita nových inhibitorů na bázi O-benzyl-salicylamidu připravených z leucinu a fenylalaninu.	Inhibice degradace proteinu je jednou ze strategií pro potlačení nekontrolované proliferace nádorových buněk. Proteolytická degradace v buňkách je hlavně zajištěna proteazomem a jeho inhibice bortezomibem prokázala přínos v klinickém použití při léčbě mnohočetného myelomu. Zde uvádíme knihovnu antiproteasomálních O-benzylsalicylamidů vyrobených z leucinu a fenylalaninu. Připravené sloučeniny vykazovaly antiproliferační aktivitu na rakovinových buněčných liniích K562, CEM a U266 v rozmezí od vysokých mikromolárních až submikromolárních hodnot Gl50. Nejsilnější sloučeniny (série 4 a 6) byly dále testovány na inhibici proteasomu 26S proteázy v buňkách U266. Většina sloučenin inhibovala proteasom ve střední-nanomolární koncentraci (IC50 v rozmezí od 57 do 197 nM) a korelovala s buněčnou potencí. V testu založeném na buňkách zahrnujícím zeleně fluoreskující protein (GFP) připojeným ke krátkému degronu, který je rychle degradován proteasomem, sloučeniny indukovaly akumulaci GFP, vizualizované a kvantifikované zobrazením živých buněk. Úrovně polyubiquitinovaných proteinů v buňkách U266 ošetřených sloučeninou 4m byly rovněž analyzovány imunoblotováním, což odhalilo typický povlak konjugátů ubiquitinu s vysokou molekulovou hmotností. Konečně, apoptotická buněčná smrt u léčených buněk U266 byla detekována biochemicky měřením aktivity kaspáz 3 a 7 v lyzátech a imunoblotováním kaspázy 7, její substrátové poly(ADP-ribóza)polymerázy a Mcl-1, které dohromady vykazovaly změny typické pro apoptózu. Všechna tato pozorování byla v souladu s očekávaným buněčným mechanizmem účinku a potvrdily proteasomové zacílení připravenými O-benzylsalicylamidy.	inhibitor proteasomu; apoptosa; ubiquitin; salicylamid
eng	Synthesis and proteasomal activity of novel O-benzyl salicylamide-based inhibitors built from leucine and phenylalanine	Inhibition of protein degradation is one of strategies for suppression of uncontrolled proliferation of cancer cells. Proteolytic degradation in cells is mainly ensured by proteasome and its inhibition by bortezomib showed benefit in clinical use for the treatment of multiple myeloma. We report here the library of antiproteasomal O-benzyl salicylamides built from leucine and phenylalanine. Prepared compounds displayed antiproliferative activity on K562, CEM and U266 cancer cell lines, ranging from high micromolar to submicromolar GI50 values. The most potent compounds (series 4 and 6) were further assayed for their inhibition of chymotrypsin-like protease activity of the 26S proteasome in U266 cells. The majority of compounds inhibited the proteasome in mid-nanomolar concentrations (IC50 ranging from 57 to 197 nM) and it correlated with cellular potency. In a cell based assay involving green fluorescence protein (GFP) fused to a short degron that is rapidly degraded by a proteasome the compounds induced accumulation of GFP, visualised and quantified by live-cell imaging. Levels of polyubiquitinated proteins in U266 cells treated by compound 4m were also analyzed by immunoblotting, revealing a typical high molecular mass smear of ubiquitin conjugates. Finally, apoptotic cell death in treated U266 cells was detected biochemically by measuring the activity of caspases 3 and 7 in lysates and by immunoblotting of caspase 7, its substrate poly(ADP-ribose)polymerase, and Mcl-1, which all together showed changes typical for apoptosis. All these observations were in agreement with expected cellular mechanism of action and confirmed proteasome targeting by prepared O-benzyl salicylamides.	proteasome inhibitor; apoptosis; ubiquitin; salicylamide

Search

Login for students

Login for employees

Publication detail

Departments

Other Parts

Map

Services

Popular Links