University of PardubiceFaculty of Chemical Technology

University

Employees
|
Students
Česky

Publication detail

Magnetické mikročástice s imobilizovanými proteinkinázami pro in vitro fosforylace peptidů a proteinů

Authors: Slováková Marcela | Hromádková Lenka | Fojtíková Markéta | Strouhalová Eliška | Kupčík Rudolf | Přikryl Petr | Vajrychová Marie | Bílková Zuzana

Year: 2019

Type of publication: ostatní - přednáška nebo poster

Page from-to: nestránkováno

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Magnetické mikročástice s imobilizovanými proteinkinázami pro in vitro fosforylace peptidů a proteinů	Imobilizace kináz má využití v biotechnologii, kde jsou kinázy součástí specializovaných biosenzorů. Ve srovnání se solubilními kinázami mají imobilizované kinázy výhody především opakovaného použití, možnost dlouhodobého skladování a vyšší enzymovou stabilitu. Při fosforylaci proteinů a peptidů pomocí imobilizovaných proteinkináz je tak výsledný produkt vysoce čistý a není kontaminován solubilními enzymy. V případě potřeby vícenásobných fosforylací substrátu je možné postupně použít nosiče s imobilizovanými kinázami případně imobilizované kinázy ve směsi. Metody využívané k imobilizaci kináz na pevné nosiče zahrnují metody adsorpce, kovalentní vazby a zachycení pomocí glutaraldehydu. Fosforylace proteinů, jako jejich významná posttranslační modifikace, má velký vliv na fyziologické funkce proteinů, zejména těch, které jsou v nativní konformaci a podílejí se na mnoha neurodegenerativních onemocněních. Strukturální a funkční studie takových proteinů však vyžadují plně definovanou fosforylaci, včetně těch, které nejsou fyziologické. V této prezentaci bude představen vývoj imobilizovaných serinových, threoninových a tyrosinových proteinkináz s použitím magnetických mikrosfér. Princip magnetické separace částic s imobilizovanými kinázami usnadňuje a zvyšuje laboratorní komfort potřebných separací fosforylovaných substrátů. K ověření enzymových aktivit a stabilit po imobilizaci proteinkináz na magnetické mikročástice byly zvoleny peptidové substráty s vyhodnocením pomocí hmotnostní spektrometrie. Imobilizované proteinkinázy byly použity k fosforylaci rekombinantního tau proteinu a myelinového bazického proteinu.	Magnetické částice; imobilizované proteinkinázy; in vitro fosforylace; proteiny