University of PardubiceFaculty of Chemical Technology

University

Employees
|
Students
Česky

Publication detail

Tailored Gradient Optimization Strategy for LC-MS/MS in MRM Mode: Practical Applications

Authors: Kašpar Michal | Kubáleková Jana | Martincová Barbora | Řezková Soňa | Bajer Tomáš | Česla Petr

Year: 2025

Type of publication: ostatní - přednáška nebo poster

Page from-to: nestránkováno

Titles:

Language	Name	Abstract	Keywords
cze	Specifická strategie optimalizace gradientu pro LC-MS/MS v módu MRM: Praktické aplikace	Cíl U cílené LC-MS/MS analýzy vyžaduje vývoj metody vyvážení chromatografické separace, selektivity detekce a analytické propustnosti. Zatímco tradiční optimalizace LC klade důraz na bazální rozlišení, použití MS/MS v módu MRM tuto potřebu výrazně snižuje a zároveň přináší nové výzvy, jako jsou matrixové efekty, omezení délkou cyklu a účinnost ionizace. Představujeme novou a zjednodušenou strategii pro optimalizaci gradientových elucí, která zohledňuje společné chování LC a MS/MS systému. Přístup integruje tři klíčová kritéria — chromatografickou separaci, překrývání MRM oken a celkový čas analýzy — do jediného hodnoticího parametru: Gradient Score. Tento optimalizační rámec byl použit pro tvorbu gradientového programu určeného k simultánní kvantifikaci široké škály fenolických látek v komplexních potravinových matricích, včetně kávy a jablečného octa. Navržená strategie představuje racionální a efektivní nástroj pro návrh robustních metod v cílených LC-MS/MS postupech s vysokou propustností. Metody Ke sledování změn v profilu fenolických látek během pražení kávových zrn a zrání jablečného octa byl použit HPLC systém Agilent 1260 (Agilent Technologies) spojený s tandemovým hmotnostním spektrometrem QTrap 4500 (AB Sciex). Pro analýzu pražených kávových zrn byla použita kolona Luna Omega Polar C18 (Phenomenex). Eluce probíhala gradientem voda–acetonitril s přídavkem 0,1 % kyseliny octové. V případě vzorků jablečného octa byla použita kolona InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 (Agilent Technologies). Mobilní fáze se skládala z vody a methanolu, oba roztoky okyselené 0,025 % kyseliny octové. Výsledky Bylo navrženo a vyhodnoceno několik gradientových profilů pomocí navržené optimalizační strategie. Na základě vypočteného Gradient Score byl pro každou analytickou aplikaci vybrán nejvhodnější gradientový program. Tento optimalizační rámec byl aplikován při vývoji gradientu pro simultánní kvantifikaci širokého spektra fenolických látek (n = 48 a 17) v
eng	Tailored Gradient Optimization Strategy for LC-MS/MS in MRM Mode: Practical Applications	Objective In targeted LC-MS/MS analysis, method development requires a balance between chromatographic separation, detection selectivity, and analytical throughput. While traditional LC optimization emphasizes baseline resolution, the use of MS/MS in MRM mode reduces this requirement and introduces new challenges, such as matrix effects, cycle time limitations, and ionization efficiency. We present a novel and streamlined strategy for optimizing gradient elution profiles that accounts for the combined behavior of the LC and MS/MS systems. The approach integrates three key criteria—chromatographic separation, MRM windows overlap, and total analysis time—into a single evaluation metric: the Gradient Score. This optimization framework was applied to the development of a gradient program for the simultaneous quantification of numerous phenolic compounds in complex food matrices, including coffee and apple cider vinegar. The proposed strategy provides a rational and efficient tool for designing robust methods in high-throughput targeted LC-MS/MS workflows. Methods An Agilent 1260 HPLC system (Agilent Technologies) coupled with a QTrap 4500 tandem mass spectrometer (AB Sciex) was used to monitor changes in the profile of phenolic compounds during coffee bean roasting and apple cider vinegar maturation. For the analysis of roasted coffee beans, a Luna Omega Polar C18 column (Phenomenex) was employed. The elution was performed using a water–acetonitrile gradient with 0.1% acetic acid as an additive. In the case of apple cider vinegar samples an InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 column (Agilent Technologies) was used. The mobile phase consisted of water and methanol, both acidified with 0.025% acetic acid. Results Several gradient elution profiles were designed and evaluated using the proposed optimization strategy. Based on the calculated Gradient Score, the most suitable profile was selected for each analytical application. This optimization framework was applied to