Publikace detail

Stanovení malondialdehydu v lidských erytrocytech pomocí kapalinové chromatografie s UV‑Vis detekcí

Autoři: Kanďár Roman | Žáková Pavla | Richter Michal | Skalický Jiří

Rok: 2004

Druh publikace: ostatní - přednáška nebo poster

Název zdroje: FONS 2004, Sympozium klinické biochemie

Název nakladatele: STAPRO s.r.o. Pardubice

Místo vydání:

Strana od-do:

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Stanovení malondialdehydu v lidských erytrocytech pomocí kapalinové chromatografie s UV‑Vis detekcí	V procesu neenzymové peroxidace lipidů vyvolané reaktivními formami kyslíku vzniká malondialdehyd (MDA), který může být vhodným ukazatelem oxidačního stresu in vivo. MDA je navíc cytotoxická a genotoxická látka způsobující zesíťování a polymeraci proteinů a nukleotidů. Nejčastější stanovení MDA v biologickém materiálu je založeno na reakci s kyselinou 2‑thiobarbiturovou (TBA) v kyselém prostředí za vzniku fialového komplexu, který se měří spektrofotometricky. Metoda je málo specifická a pro stanovení MDA v erytrocytech nevhodná. Specifitu lze zvýšit separací komplexu MDA(TBA)2 od interferujících látek pomocí HPLC. Cílem této studie bylo zavést vhodnou metodu pro stanovení MDA v erytrocytech. Stanovovali jsme MDA v lyzátu erytrocytů po předchozí derivatizaci a následné extrakci vzniklého komplexu MDA(TBA)2 do n‑butanolu pomocí HPLC na obrácené fázi s UV‑Vis detekcí při 532 nm. Jako mobilní fázi jsme použili methanol ‑ fosfátový pufr (35:65 v/v), pH = 6,1 a methanol ? fosfátový pufr (80:20 v/v), pH = 6,1. Analytické parametry metody jsou vyhovující: přesnost v sérii s CV = 1,58%, přesnost mezi sériemi s CV = 8,95%. Linearita je zachována v rozmezí koncentrací (0,10 ‑ 22,00) umol/l. Mez detekce byla stanovena na hodnotu 0,15 umol/l malondialdehydu. Výtěžnost metody, určena metodou standardních přídavků, byla zatím nedostačující (74,49% s CV = 1,24%). Objasnění nízké výtěžnosti prezentované metody je předmětem dalšího zkoumání. Měřili jsme MDA v lyzátech erytrocytů u dobrovolných dárců krve (n = 69, 34 žen a 35 mužů, ve věku od 27 do 61 let). Vzorky krve jsme odebírali venepunkcí do zkumavek obsahující EDTA. Erytrocyty jsme promývali fyziologickým roztokem (3krát). Po posledním promytí jsme k erytrocytům přidali vychlazenou deionizovanou vodu. Lyzát erytrocytů jsme uskladňovali v mrazícím boxu (-80 °C). Doba uskladnění nepřesáhla 1 měsíc. Hladiny MDA v erytrocytech, naměřené u dobrovolných dárců krve, se pohybovaly v rozmezí 139,4 +/-	malondialdehyd; oxidační stres; lipoperoxidace; kapalinová chromatografie; erytrocyty
eng	Determination of malondialdehyde in human erythrocytes using liquid chromatography with UV-Vis detection		malondialdehyde; oxidative stress; lipid peroxidation; liquid chromatography; erythrocytes

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte