Publikace detail

Epitope mapping of allergen ovalbumin using biofunctionalized magnetic beads packed in microfluidic channels: the first step towards epitope-based vaccines

Rok: 2008

Druh publikace: článek v odborném periodiku

Název zdroje: Journal of Chromatography A

Název nakladatele: Elsevier Science BV

Místo vydání: Amsterdam

Strana od-do: 64-71

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Epitopové mapování alergenu ovalbuminu s použitím biofunkcionalizovaných magnetických částic umístěných v mikrofluidních kanálcích: první krok k epitopovým vakcínám	Specifická alergenová imunoterapie je často spojena s nepříznivými reakcemi. Jsou vyvíjeny různé strategie ke snížení alergenicity a současnému zachování terapeutických účinků. Jedním takovým přístupem je peptidová imunoterapie. Probíhá vývoj metod pro jednoduchou a rychlou identifikaci imunogenních epitopů alergenů (tj. alergenních epitopů), které mohou potenciálně vést k vývoji peptidových vakcín. Technika epitopové extrakce, založená na biofunkcionalizovaných magnetických mikročásticích uspořádaných vlivem magnetického pole v kanálku jednoduchého mikrofluidního zařízení vyrobeného z polydimethylsiloxanu, byla použita pro izolaci a identifikaci potenciálních alergenních epitopů. Podobně jako u chromatografických kolonových separací, jednoduše vyměnitelný shluk uspořádaných částic v kanálku těží především z velkého poměru povrchu a objemu a zvýšené interakce povrchů s procházejícími vzorky. Ovalbumin, hlavní protein vaječného bílku a typický zástupce potravinových alergenů, byl zvolen jako modelová molekula. Vysoce rezistentní ovalbumin byl nejprve účinně naštěpen magnetickým proteolytickým reaktorem s vázaným trypsinem ošetřeným L-1-tosylamido-2-phenylethyl chloromethyl ketonem a druhý krok, tj. zachycení alergenních epitopů ze směsi peptidů, byl proveden pomocí magnetického imunoafinitního nosiče s orientovaně imobilizovanými králičími IgG molekulami proti ovalbuminu. Zachycené peptidy byly uvolněny 0,05% kyselinou trifluoroctovou. Eluční frakce byly analyzovány MALDI-TOF hmotnostní spektrometrií. Tímto postupem byl identifikován peptidový fragment ovalbuminu HIATNAVLFFGR (m/z: 1345.75, pozice: 371?382) jako významný alergenní epitop. Tato technika mikrofluidní magnetické epitopové extrakce použitá pro epitopové mapování ovalbuminu má potenciál být významným krokem pro vývoj bezpečných a cenově přístupných epitopových vakcín.	ovalbumin, potravinový alergen, epitopová extrakce, biofunkcionalizované magnetické částice, mikrofluidní zařízení, epitopové vakcíny
eng	Epitope mapping of allergen ovalbumin using biofunctionalized magnetic beads packed in microfluidic channels: the first step towards epitope-based vaccines	Specific allergen immunotherapy is frequently associated with adverse reactions. Several strategies are being developed to reduce the allergenicity while maintaining the therapeutic benefits. Peptide immunotherapy is one such approach. Methods for the simple and rapid identification of immunogenic epitopes of allergens (i.e. allergenic epitopes) are ongoing and could potentially lead to peptide-based vaccines. An epitope extraction technique, based on biofunctionalized magnetic microspheres self-organized under a magnetic field in a channel of a simple microfluidic device fabricated from polydimethylsiloxane, was applied in the isolation and identification of prospective allergenic epitopes. Similarly to chromatographic column separations, the easily replaceable plug of self-organized beads in the channel benefits especially from an even larger surface-to-volume ratio and an enhanced interaction of the surfaces with passing samples. Ovalbumin, the major protein of egg white and a typical representative of food allergens, was selected as the model molecule. Highly resistant ovalbumin was at first efficiently digested by a magnetic proteolytic reactor with trypsin treated with l-1-tosylamido-2-phenylethyl chloromethyl ketone and the second step, i.e. capture of allergenic epitopes from the mixture of peptides, was performed by a magnetic immunoaffinity carrier with orientedly immobilized rabbit anti-ovalbumin IgG molecules. Captured peptides were released with 0.05% trifluoroacetic acid. The elution fractions were analyzed by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry. The peptide fragment of ovalbumin HIATNAVLFFGR (m/z: 1345.75, position: 371?382) was identified as a relevant allergenic epitope in this way. Such a microfluidic magnetic force-based epitope extraction technique applied in the epitope mapping of ovalbumin has the potential to be a significant step towards developing safe and cost-effective epitope-based vaccines.	ovalbumin, food allergen, epitope extraction, biofunctionalized magnetic beads, microfluidic device, epitope-based vaccine

Search

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte