Univerzita Pardubice Fakulta chemicko- technologická

Univerzita Pardubice

Zaměstnanci
|
Studenti
English

Publikace detail

MICROFLUIDIC ISOLATION AND IDENTIFICATION OF IMMUNOGENIC EPITOPES

Autoři: Jankovičová Barbora | Rösnerová Šárka | Slováková Marcela | Řehulka Pavel | Minc Nicolas | Hernychová Lenka | Viovy Jean-Louis | Bílková Zuzana

Rok: 2008

Druh publikace: ostatní - přednáška nebo poster

Název zdroje: Book of abstracts-poster presentations

Strana od-do: nestránkováno

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Mikrofluidní izolace a identifikace imunogenních epitopů	Studie identifikující epitopy mnoha hlavních alergenů jsou významné pro vývoj bezpečných na epitopu založených peptidových vakcín pro širokou oblast alergických přecitlivělostí [1]. Využití krátkých lineárních peptidových sekvencí ve shodě s hlavními alergogenními epitopy celých specifických alergenů mohou významně omezit tzv. cross-linking efekt a relativně často se vyskytující průvodní nepříznivé reakce při specifické imunoterapii. Tato práce se zaměřila na analýzu potravinových alergenů. Potenciální alergogenní epitopy byly analyzovány pomocí techniky epitopové extrakce založené na enzymatickém naštěpení alergenu následovaném extrakcí alergogenních peptidů specifickými polyklonálními protilátkami [2]. Potravinové alergeny jsou typické proteiny, které jsou rezistentní k enzymatickému štěpení [3], proto byl jako modelový alergen vybrán ovalbumin, hlavní protein vaječného bílku. Pro separaci a izolaci imunogenních epitopů byl použit jednoduchý osvědčený mikrofluidní systém vyrobený z polydimethylsiloxanu (PDMS) [4,5] s integrovanými bioaktivními magnetickými reaktory. První krok, tj. limitované a/nebo úplné proteolytické štěpení ovalbuminu, byl proveden s použitím magnetických mikroreaktorů (IMERs) s imobilizovaným TPCK-trypsinem (magnetické mikročástice SiMAG-COOH, Chemicell, Německo) a druhý krok, tj. zachycení alergogenních epitopů ze směsi peptidů získaných proteolýzou, s použitím magnetických mikroreaktorů (IMARs) s imobilizovanými specifickými králičími polyklonálními anti-OVA IgG protilátkami (magnetické mikročástice SiMAG-Hydrazide, Chemicell, Německo). Specificky zachycené peptidy byly uvolněny z imunokomplexu se specifickou protilátkou 0,05% TFA. Eluční frakce byly analyzovány MALDI-TOF/TOF hmotnostní spektrometrií (Applied Biosystems 4700) a byl tak identifikován imunogenní epitop ovalbuminu HIATNAVLFFGR (M/z: 1345.75, pozice: 371-382, missed cleavages: 0). Tyto výsledky získané mikrofluidní separací jsou více zřejmé a průkazné v porovnání s těmi získaným	alergen, epitopová extrakce, magnetický mikroreaktor, mikrofluidní zařízení
eng	MICROFLUIDIC ISOLATION AND IDENTIFICATION OF IMMUNOGENIC EPITOPES	Studies identifying epitopes in a number of major allergens provide the future of safe epitope-based peptide vaccines for a wide range of allergic sensitizations [1]. The utilization of short linear peptide sequences in accordance with main allergogenic epitopes of the whole specific allergens can strongly reduce the cross-linking effect and accompanying relatively high incidence of adverse events within specific immunotherapy. This work was focused on analysis of food allergens. Prospective allergogenic epitopes were isolated by using epitope extraction technique based on enzymatic digestion of the allergen followed by extraction of the allergogenic peptides with specific polyclonal antibody [2]. Food allergens are typically proteins that are resistant to enzymatic digestion [3] therefore ovalbumin, the major protein of egg white, was selected as model allergen. Simple well-established microfluidic device fabricated in polydimethylsiloxane (PDMS) [4, 5] with integrated bioactive magnetic reactors was used for separation and isolation of immunogenic epitopes. The first step i.e. limited and/or total proteolytic digestion of ovalbumin was carried out using magnetic microreactors (IMERs) with immobilized TPCK-trypsin (magnetic microparticles SiMAG-COOH, Chemicell, Germany) and the second step i.e. capturing of allergogenic epitopes from mixture of peptides obtained by proteolysis using magnetic microreactors (IMARs) with immobilized specific rabbit polyclonal anti-OVA IgG antibodies (magnetic microparticles SiMAG-Hydrazide, Chemicell, Germany). Specifically captured peptides were released from immunocomplex with specific antibody by 0.05 % TFA. The elution fractions were analyzed by MALDI-TOF/TOF mass spectrometer (Applied Biosystems 4700) and immunogenic epitope of ovalbumin HIATNAVLFFGR (M/z: 1345.75, position: 371-382, missed cleavages: 0) was identified in this way. These results obtained by microfluidic separation are more obvious and conclusive in comparis	allergen, epitope extraction, magnetic microreactor, microfluidic device