Publikace detail

Enzyme-Linked Electrochemical Detection of PCR-Amplified Nucleotide Sequences Using Disposable Screen-Printed Sensors. Applications in Gene Expression Monitoring

Autoři: Horáková Petra | Fojtová Miloslava | Vytřas Karel | Fojta Miroslav

Rok: 2008

Druh publikace: článek v odborném periodiku

Název zdroje: Sensors

Název nakladatele: Molecular Diversity Preservation International

Místo vydání: Basel

Strana od-do: 193-210

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Imunoelektrochemická detekce nukleotidových sekvencí po PCR s využitím jednorázových tištěných senzorů. Uplatnění při monitorování exprese genů	Jsou představeny imunoelektrochemické techniky pro sledování specifických sekvencí DNA. Tyto techniky jsou založeny na navázání konjugátu streptavidin-alkalická fosfatáza na biotinové značky DNA, imobilizované na povrch jednorázových uhlíkových tištěných elektrod (SPCE) s následnou produkcí a electrochemickým stanovením elektroaktivního indikátoru 1-naftolu. Bylo dosaženo vysoce specifického rozlišení mezi komplementárními a nekomplementárními nukleotidovými sekvencemi hybridizací imobilizované DNA s biotinem značenými sondami. Hybridizační stanovení s využitím imunoenzymové reakce bylo úspěšně využito při analýze sekvencí genomické DNA po aplikaci PCR techniky a při sledování exprese genů v rostlinách. Dále byl představen další způsob specifické inkorporace biotinem značených nukleotidů do DNA pomocí techniky primer extension. Zavedení několika biotinových značek na sondu primeru významně zvýšilo intenzitu signálu a zlepšilo specifitu stanovení.	elektrochemická detekce;stanovení s využitím enzymu;hybridizace DNA;prodloužení primeru;PCR;exprese genu
eng	Enzyme-Linked Electrochemical Detection of PCR-Amplified Nucleotide Sequences Using Disposable Screen-Printed Sensors. Applications in Gene Expression Monitoring	Electrochemical enzyme-linked techniques for sequence-specific DNA sensing are presented. These techniques are based on attachment of streptavidin-alkaline phosphatase conjugate to biotin tags tethered to DNA immobilized at the surface of disposable screen-printed carbon electrodes (SPCE), followed by production and electrochemical determination of an electroactive indicator, 1-naphthol. Via hybridization of SPCE surface-confined target DNAs with end-biotinylated probes, highly specific discrimination between complementary and non-complementary nucleotide sequences was achieved. The enzyme-linked DNA hybridization assay has been successfully applied in analysis of PCR-amplified real genomic DNA sequences, as well as in monitoring of plant tissue-specific gene expression. In addition, we present an alternative approach involving sequence-specific incorporation of biotin-labeled nucleotides into DNA by primer extension. Introduction of multiple biotin tags per probe primer resulted in considerable enhancement of the signal intensity and improvement of the specificity of detection.	electrochemical detection;enzyme-linked assay;DNA hybridization;primer extension; PCR;gene expression

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte