Publikace detail

Determination of reduced and oxidized glutathione in biological material by HPLC with electrochemical detection

Autoři: Kanďár Roman | Žáková Pavla | Marková Miroslava

Rok: 2007

Druh publikace: článek ve sborníku

Název zdroje: Clinical Chemistry and Laboratory Medicine Special Supplement

Název nakladatele: Walter de Gruyter GmbH & Co. KG

Místo vydání: Berlin

Strana od-do: S195

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Stanovení redukovaného a oxidovaného glutathionu v biologickém materiálu pomocí HPLC s elektrochemickou detekcí	Úvod. Tripeptid glutathion hraje významnou úlohu v biologických systémech. Chrání před působením reaktivních sloučenin kyslíku a dusíku a podílí se na detoxikaci škodlivých sloučenin. Metody. Byla vyvinuta metoda pro stanovení jak redukovaného, tak také oxidovaného glutathionu v plné krvi a hepatocytech. Separace redukovaného a oxidovaného glutathionu byla dosažena isokratickou elucí na koloně Polaris 5u C-18A, 250 x 4,6 mm. Jako mibilní fáze byla použita směs methanolu a 25 mmol/l dihydrogenfosforečnanu sodného o pH 3,0 (6:94, v/v). Výsledky. Analytické parametry této metody jsou dostatečné. Variační koeficienty pro přesnost v sérii v plné krvi a potkanních hepatocytech byly 2,1% a 2,2% pro redukovaný a 4,7% a 4,9% pro oxidovaný glutathion. Výtěžnosti metody pro plnou krev dosahovaly těchto hodnot: 91,2% (CV 3,3%) pro redukovaný a 94,1% (CV 8,3%) pro oxidovaný glutathion. Kalibrační křivky měly lineární průběh v rozmezí (5-2000) umol/l (redukovaný glutathion) a (1-500) umol/l (oxidovaný glutathion). Pro redukovaný glutathion byl detekční limit 50 pmol, zatímco pro oxidovaný glutathion dokonce 10 pmol. Závěry. Porovnávali jsme metodu HPLC s elektrochemickou detekcí s metodou kapalinové chromatografie s detekcí fluorescenční, a to u padesáti vybraných vzorků plné krve. Lineární regrese ukazuje, že výsledky získané metodou HPLC s elektrochemickou detekcí jsou vyšší: HPLC/ED = 0,9112HPLC/FD + 3,5230; R = 0,9917 (redukovaný glutathion) a HPLC/ED = 0,8879HPLC/FD + 8,1521; R = 0,9911 (oxidovaný glutathion). Poděkování. Tato práce byla podpořena grantem MSM 0021627502.	redukovaný a oxidovaný glutathion; kapalinová chromatografie s elektrochemickou detekcí
eng	Determination of reduced and oxidized glutathione in biological material by HPLC with electrochemical detection	Background. Tripeptid glutathione plays an important role in biological systems. It protects against the action of some reactive oxygen and nitrogen species and is involved in detoxication of harmful compounds. Methods. A method for determination of both reduced and oxidized glutathione in whole blood and hepatocytes has been developed and evaluated. Chromatography of both reduced and oxidized glutathione was accomplished using isocratic elution on Polaris 5u C18-A, 250 x 4.6 mm, i.d. column. The mixture of methanol and 25 mmol/L sodium dihydrogen phosphate, pH 3.0 (6:94 v/v) was used as a mobile phase. Results. The analytical performance of this method is satisfactory. The intra-assay coefficients of variation in whole blood and rat hepatocytes were 2.1% and 2.2% for reduced and 4.7% and 4.9% for oxidized glutathione. The recoveries were following: 91.2% (CV 3.3%) for reduced and 94.1% (CV 8.3%) for oxidized glutathione in the whole blood. The calibration curve was linear in the whole range tested (5-2000) umol/L for reduced glutathione and (1-500) umol/L for oxidized glutathione. The detection limit was 50 pmol for reduced and 10 pmol for oxidized glutathione. Conclusions. A comparison of the methods HPLC with electrochemical detection and HPLC with fluorescence detection was executed on the samples whole blood (n=50). Linear regression shows that results obtained by HPLC with electrochemical detection are higher: HPLC/ED = 0.9112HPLC/FD + 3.5230; R = 0.9917 for reduced glutathione and HPLC/ED = 0.8879HPLC/FD + 8.1521; R = 0.9911 for oxidized glutathione. This work was supported by grant MSM 0021627502.	reduced and oxidized glutathione; liquid chromatography with electrochemical detetction

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte