Publikace detail

VYUŽITÍ MAGNETICKÝCH BIOAFINITNÍCH MIKROREAKTORŮ PRO IZOLACI IMUNOGLOBULINU E Z LIDSKÉHO SÉRA

Autoři: Jankovičová Barbora | Rösnerová Šárka | Fojtíková Lucie | Královský Josef | Bílková Zuzana

Rok: 2007

Druh publikace: článek ve sborníku

Název zdroje: Chemické listy

Název nakladatele: Česká společnost chemická

Místo vydání: Praha

Strana od-do: 442

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	VYUŽITÍ MAGNETICKÝCH BIOAFINITNÍCH MIKROREAKTORŮ PRO IZOLACI IMUNOGLOBULINU E Z LIDSKÉHO SÉRA	Magnetické bioafinitní mikroreaktory jsou systémy, které splňují požadavky kladené na metody pro izolaci a detekci diagnosticky významných látek v komplexním biologickém materiálu. Vysoká selektivita a specifita metody je zde zajištěna tvorbou biospecifického páru vázaného ligandu s izolovanou látkou. Magneticky aktivní pevná fáze přináší snadnou manipulaci a miniaturizaci celého systému. Protilátky třídy IgE (tj. imunoglobulin E) mají značný klinický význam. Zvýšené hladiny specifických IgE protilátek jsou hlavní příčinou alergických reakcí, které se pro svůj rostoucí trend v populaci stávají závažným medicínským problémem. Koncentrace IgE ve fyziologickém lidském séru je v porovnání s ostatními sérovými proteiny velmi nízká (do 200 IU/ml). Cílem této práce je vyvinout rychlou a účinnou metodu izolace protilátek třídy IgE ze sér senzibilizovaných pacientů. Tyto protilátky budou použity k přípravě specifického imunosorbentu pro vyhledávání klinicky významných tzv. alergogenních epitopů komplexního alergenu. Příprava vakcín pro specifickou imunoterapii obsahujících pouze epitopy s alergogenním potenciálem může významně snížit rizikovost hyposenzibilizační léčby a tedy i zátěž pro pacienta. Výběr metod pro účinnou izolaci IgE molekul byl volen podle nároků na čistotu a výtěžnost metody. K izolaci IgE ze sér senzibilizovaných pacientů byla použita metoda frakcionované precipitace, technika chromatografie na měničích iontů a metoda bioafinitní chromatografie a to buď pomocí lektinu Concanavalinu A nebo pomocí specifických anti-IgE protilátek. K přípravě specifických bioafinitních nosičů byly použity magnetické mikročástice SiMAG-active (Chemicell, Německo) a Estapor (Merck, Německo), podmínky vazby byly optimalizovány. Frakce IgE získané různými metodami, příp. jejich kombinací, byly porovnány, čistota a množství izolovaného IgE byly ověřovány technikami SDS-PAGE a ELISA.	imunoglobulin E; bioafinitní mikroreaktory
eng	UTILIZATION OF MAGNETIC BIOAFFINITY MICROREACTORS FOR ISOLATION OF IMMUNOGLOBULIN E FROM HUMAN SERUM	Magnetic bioaffinity microreactors are systems satisfying the requirements posed on methods for isolation and detection of diagnostically significant substances in complex biological material. High selectivity and specificity of this method are provided by formation of biospecific pair between bound ligand and isolated substance. Magnetically active solid phase offers simple handling and miniaturization of whole system. Antibodies of the IgE subclass (i.e. immunoglobulin E) have considerable clinical importace. Increased levels of specific IgE antibodies are the main reason of allergic reactions, which come to be important medical problem for their expanding in population. In contrast to other serum proteins, the concentration of IgE in physiological human serum is very low (up to 200 IU/ml). Development of rapid and effective method for isolation of antibodies of the IgE subclass from serum of sensitized patients is the aim of this work. These antibodies will be used for preparation of specific immunosorbent for detection of clinically significant, so-called allergogenic, epitopes of complex allergen. Preparation of vaccines for specific immunotherapy containing only epitopes with allergogenic potential can reduce significantly riskiness of hyposensitization therapy as well as endurance for patient. The choice of the methods for effective isolation of IgE molecules was chosen according to demands on purity and yield of the method. Method of fractioned precipitation, ion-exchange chromatography and bioaffinity chromatography through the use of Concanavalin A or specific anti-IgE antibodies were used for isolation of IgE from serum of sensitized patiens. Magnetic microparticles SiMAG-active (Chemicell, Germany) and Estapor (Merck, Germany) were utilized to preparation of specific bioaffinity carriers, conditions of binding were optimised. Fractions of IgE obtained by the different methods, eventually by their combination, were compared, purity and quantity of is	immunoglobulin E; bioaffinity microreactors

Search

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte