Publikace detail

Determination of malondialdehyde in biological samples using liquid chromatography with reference to sample preparation

Autoři: Kanďár Roman | Žáková Pavla | Richter Michal

Rok: 2005

Druh publikace: článek ve sborníku

Název zdroje: Clinica Chimica Acta

Název nakladatele: Elsevier Science BV

Místo vydání: Amsterdam

Strana od-do: 219

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Stanovení malondialdehydu v biologických vzorcích pomocí kapalinové chromatografie s ohledem na přípravu vzorku	Nejrozšířenější metodou pro určení oxidačního stresu je stanovení malondialdehydu (MDA), stabilního produktu oxidativního rozkladu polynenasycených mastných kyselin s více než dvěmi dvojnými vazbami. Tato práce se zabývá precizní přípravou biologického vzorku před HPLC analýzou. Naše metoda je založena na tvorbě komplexu mezi MDA a 2-thiobarbiturovou kyselinou (TBA). Testovali jsme: vliv chelatačního činidla na lipoperoxidaci in vitro během derivatizace, různá rozpouštědla pro extrakci MDA-TBA komplexu a výtěžnost metody. Zjistili jsme signifikantně vyšší hladiny MDA ve vzorcích bez přídavku EDTA (1,11 ? 0,18) umol/l, n = 69 oproti vzorkům s přídavkem EDTA (0,72 ? 0,13) umol/l, n = 69; Studentův t-test, alfa = 0,05, p < 0,001. Testovali jsme osm různých rozpouštědel pro extrakci komplexu MDA-TBA: n-butanol, 1-propanol, 2-propanol, hexan, heptan, ethylacetát, ethylether a dichlormethan. Zjistili jsme, že pouze extrakce n-butanolem vede k maximální výtěžnosti. Pro sestrojení kalibrační křivky jsme připravovali standardy MDA ředěním vodných roztoků malondialdehydtetrabutylammonia v séru (1 + 9). V takovém případě byla výtěžnost MDA 97,3% (CV = 3,8%). Tato práce poskytuje vysoce specifickou a selektivní metodu pro stanovení MDA v biologických vzorcích.	malondialdehyde; HPLC
eng	Determination of malondialdehyde in biological samples using liquid chromatography with reference to sample preparation	The most widely adopted method for valuation of oxidative stress is the estimation of the level of malondialdehyde (MDA), a stable product of the oxidative degradation of polyunsaturated fatty acids with more than two double bonds. This work refers to precise preparation of biological sample prior to HPLC analysis. Our method is based on the formation of the complex between MDA and 2-thiobarbituric acid (TBA). We have tested: effect of chelating agent on lipoperoxidation in vitro during derivatization step, different solvents for extraction of the MDA-TBA complex, and recovery of method. We found significantly increased levels of MDA in samples without addition of EDTA (1.11 ? 0.18) umol/l, n = 69 vs. (0.72 ? 0.13) umol/l, n = 69; Student?s t test, alpha = 0.05, p < 0.001. Eight different solvents were tested: n-butanol, 1-propanol, 2-propanol, hexane, heptane, ethyl acetate, ethyl ether, and dichloromethane for extraction of the MDA-TBA complex. We found out, that only extraction with n-butanol led to complete recovery. For construction of calibration curve we have prepared MDA standards by dilution aqueous solutions of malondialdehyde tetrabutylammonium in serum (1 + 9). The recovery of MDA was 97.3% (CV = 3.8%). This work proposes highly specific and selective method for determination of MDA in biological samples.	malondialdehyd; HPLC

Search

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte