Publikace detail

Možnosti izolace a imobilizace DNA plísní.

Autoři: Šnévajsová Iveta | Vytřasová Jarmila | Brožková Iveta

Rok: 2006

Druh publikace: ostatní - přednáška nebo poster

Název zdroje:

Název nakladatele: Masarykova univerzita

Místo vydání:

Strana od-do:

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Možnosti izolace a imobilizace DNA plísní.	Práce sleduje různé možnosti izolace a imobilizace DNA toxinogenních plísní rodu Aspergillus. Byly porovnávány a optimalizovány klasické postupy extrakce DNA s izolacemi pomocí komerčních souprav (kitů). Jednalo se o postup dle Cenise (1992), modifikovaný postup Shapiry et al. (1996) ve spojení s Cenisem (1992), dále byly použity komerční kity pro izolaci DNA z listů rostlin, ze semen a z rostlin. K izolaci DNA byla využita i komerčně dodávaná sloučenina DNAzol?ES. Pro přečištění byla DNA imobilizována na superparamagnetické křemičité částice a na diatom. Metody byly hodnoceny z hlediska čistoty lyzátu (DNA), koncentrace, rychlosti izolace, náročnosti na přístrojovou techniku a manipulaci a v neposlední řadě s ohledem na cenu jednotlivé izolace. Pro optimalizaci metod byly použity sbírkové kultury A. parasiticus var. globosus CCM F ? 550 a A. flavus CCM F ? 108. Získaná DNA byla amplifikována metodou PCR a PCR produkt byl detekován elektroforézou v agarózovém gelu. Čistota a koncentrace DNA byla vyhodnocena spektrofotometricky. Modifikovaný postup dle Shapiry et al. (1996), který k rozrušení buněčné stěny používá kapalný dusík se osvědčil jako nejúčinnější.	izolace, DNA, plísně
eng	The possibilities of isolation and immobilization of fungal DNA.	This work covers possibilities of DNA isolation and immobilization from the toxinogenic fungi of genus Aspergillus. Classical techniques of DNA extraction were optimized and compared with use of commercial PCR kits. Classical techniques included DNA extraction by Cenis (1992) and modified procedure by Shapira et al. (1996) in connection with Cenis (1992). Furthermore three commercial kits for DNA isolation from plant leaves, seeds and plants were used. For DNA isolation was also used commercially delivered compound DNAzol?ES. DNA was purified by immobilization on superparamagnetic silica particles and diatom. These methods were classified in view of DNA purity, concentration, speed of isolation, intensity of instrument techniques and manipulation and last but not least were taken single isolation cost into consideration. Methods were optimized by using pure cultures A. parasiticus var. globosus CCM F ? 550 and A. flavus CCM F ? 108. Acquired DNA was amplified by PCR and PCR product was detected by electrophoresis. Purity and concentration of DNA were identified by spectrophotometer. Modified procedure by Shapira et al. (1996) in which liquid nitrogen is used to disintegrate cell wall has proved as the most effective.	isolation, immobilisation, fungi, DNA

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte