Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

VYUŽITÍ IMOBILIZOVANÉHO LYSOZYMU PRO IDENTIFIKACI BAKTERIÁLNÍCH PROTEINŮ HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIÍ
Autoři: Holubová Lucie | Korecká Lucie | Roušar Tomáš | Hubálek Martin | Bílková Zuzana
Rok: 2011
Druh publikace: článek ve sborníku
Název zdroje: Sborník příspěvků ze semináře Monitorování cizorodých látek v životním prostredí XIII.
Název nakladatele: Univerzita Pardubice
Místo vydání: Pardubice
Strana od-do: 51-62
Tituly:
Jazyk Název Abstrakt Klíčová slova
cze VYUŽITÍ IMOBILIZOVANÉHO LYSOZYMU PRO IDENTIFIKACI BAKTERIÁLNÍCH PROTEINŮ HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIÍ Cílem této práce bylo připravit účinný nosič s imobilizovaným enzymem lysozymem pro efektivní narušení buněčné stěny G+ bakterií a získat tak materiál pro rychlou a reprodukovatelnou analýzu bakteriálního proteomu hmotnostní spektrometrií. Bylo nutné vytipovat a zavést jednoduchou metodu pro stanovení aktivity enzymu lysozymu a následně připravit nosič, kde bude enzym kovalentně vázán tak, aby jeho aktivita a stabilita byla zachována i během opakovaného použití. Pro naše účely se osvědčila citlivá spektrofluorimetrická metoda pomocí 4-methylumbelliferyl-β-D-N,N´,N´´-triacetylchito-triosidu. Lysozym byl imobilizován na magnetické částice s různými funkčními skupinami, velikostí částic i porozitou. Na základě výsledků byl vybrán nejvhodnější nosič, u kterého byla stanovena skladovací a operační stabilita. Vázaná i volná forma enzymu byly poté použity k přípravě vzorků G+bakterií určených k MALDI-TOF-MS identifikaci a výsledky byly porovnány s tradiční přípravou bakteriálních vzorků pro MS analýzu. Lysozym;Magnetické částice;Bakteriální proteiny;Hmotnostní spektrometrie
eng Utilization of immobilized lysozyme for identification of bacterial proteins by mass spectrometry The goal of this study was to develop an active carrier with immobilized enzyme lysozyme for effective disruption of G+ bacteria cell wall and obtain material for rapid and reproducible analysis of bacterial proteome by MS. Efficient method for determination of Lysozyme activity has been estimated and followed by immobilization of enzyme to the magnetic carrier. Final activity, stability and reaction conditions of immobilized enzyme were estimated. Spectrofluorimetric measurement of lysozyme activity with 4-methylumbelliferyl-β-D-N,N´,N´´-triacetylchitotrioside was found to be the most beneficial. To find the best active system the lysozyme was immobilized to the magnetic particles with different functional groups, size and porosity. The most convenient carrier with immobilized lysozyme has been selected, in which the storage and operational stability were determined. The results of total proteome analysis by MALDI-TOF-MS were compared with results obtained by traditional preanalytical approach. Lysozyme;Magnetic microparticles;Bacterial proteins;Mass spectrometry

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

zobrazit na mapy.cz

Služby

Často hledáte

© 2023 Univerzita Pardubice, Studentská 95, 532 10 Pardubice 2
Telefon: 466 036 111, 466 036 112, 466 036 113
Správce webu, RSS
ID datové schránky: f5vj9hu
Prohlášení o přístupnosti
CC BY-NC-ND 4.0 CZCreative CommonsAttributionNonCommercialNoDerivatives