Publikace detail

Využití imobilizovaných enzymů při identifikaci a charakterizaci fosforylací na proteinech

Autoři: Kroupa Tomáš | Jankovičová Barbora | Hernychová Lenka | Bílková Zuzana

Rok: 2011

Druh publikace: ostatní - přednáška nebo poster

Strana od-do: nestránkováno

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Využití imobilizovaných enzymů při identifikaci a charakterizaci fosforylací na proteinech	V této práci jsme se zaměřili na možnost využití imobilizace dvou enzymů používaných v průběhu přípravy vzorků a identifikace fosforylace, trypsin pro proteolytické štěpení proteinů a alkalickou fosfatázu, která umožňuje defosforylaci hydrolýzou vazby mezi příslušnou aminokyselinou a fosfátovou skupinou. Pro imobilizaci jsme použili postup založený na neorientované vazbě enzymů na částice s karboxylovými funkčními skupinami pomocí EDC a sulfo-NHS v prostředí fosfátového pufru. Aktivitu navázaných enzymů jsme ověřili reakcmi s příslušnými specifickými substráty, tj Nα-benzoyl-DL-arginin-4-nitroanilid hydrochorid (BAPNA) pro trypsin a p nitrofenyl fosfát pro alkalickou fosfatázu. Konečné ověření účinnosti imobilizovaných enzymů bylo provedeno pomocí modelových standardních fosfoproteinů s detekcí na hmotnostním spektrometru s MALDI ionizací.	imobilizované enzymy; fosforylace

Vyhledávání