Publikace detail

Dot-ELISA Affinity Test: An Easy, Low-Cost Method to Estimate Binding Activity of Monoclonal Antibodies

Autoři: Svobodová Zuzana | Jankovičová Barbora | Horák Daniel | Bílková Zuzana

Rok: 2013

Druh publikace: článek v odborném periodiku

Název zdroje: Journal of Analytical and Bioanalytical Techniques

Název nakladatele: OMICS Group

Místo vydání: Constanta

Strana od-do: 1-5

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Dot-ELISA afinitní test: jednoduchá, levná metoda k určení vazebné aktivity monoklonálních protilátek	Výběr správné monoklonální protilátky (mAb) pro imunoafinitní aplikace může být obtížný, protože mnoho výrobců mAb nabízí širokou škálu mAb klonů proti cílovým molekulárním strukturám. Jelikož existují značné rozdíly v kvalitě mAb klonů, a to zejména v jejich vazebné aktivitě, byla vyvinuta snadná metoda pro rychlé a levné srovnání různých mAb klonů. Dot-ELISA afinitní test je jednoduchá, univerzální a instrumentálně nenáročná technika, protože nevyžaduje žádné drahé vybavení (jako je například ELISA reader nebo chemiluminiscenční/fluorescenční zobrazovací systém), a může tak být proveden v jakékoliv biochemické laboratoři. Tato metoda je založena na již dříve popsané dot-ELISA technice, která je kombinována s chaotropním krokem za použití různých koncentrací thiokyanátu amonného v rozmezí 0-2 M. V této práci byl afinitní dot-ELISA test optimalizován s použitím Abeta peptidu jako antigenu a anti-Abeta mAb. Vyvinutý protokol byl poté aplikován na panel osmi anti- EpCAM (epiteliální molekuly buněčné adheze) mAb, které by měly být následně použity pro přípravu magnetických imunosorbentů pro záchyt cirkulujících nádorových buněk (CTCs) .	Dot blot; Dot-ELISA; afinita; monoklonální protilátka; chaotropní eluce; EpCAM; Abeta peptidy
eng	Dot-ELISA Affinity Test: An Easy, Low-Cost Method to Estimate Binding Activity of Monoclonal Antibodies	Selecting the right monoclonal antibody (mAb) for an immunoaffinity-based application can be tricky, as many mAb producers offer a wide range of mAb clones against molecular structures of interest. Since there are significant differences in the quality of mAb clones, and particularly in their binding activity, an easy method for quick and low-cost comparison of various mAb clones was developed. The dot-ELISA affinity test is a simple, versatile and instrumentally no demanding technique, since it requires no expensive equipment (such as an ELISA reader or chemiluminescence/fluorescence imaging system) and can be performed in any biochemical laboratory. This method is based on a previously described dot-ELISA technique that is improved with a chaotropic step using different concentrations of ammonium thiocyanate in the range 0-2 M. In this work, the dot-ELISA affinity test was optimized on Abeta peptide as antigen and anti-Abeta mAb. Such protocol was then applied to a panel of eight anti-EpCAM (epithelial cell adhesion molecule) mAbs which should be subsequently used for preparation of magnetic immunosorbent to capture circulating tumor cells (CTCs).	Dot blot; Dot-ELISA; Affinity; Monoclonal antibody; Chaotropic elution; EpCAM; Abeta peptides

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte