Publikace detail

Produkce a charakterizace predikovaných alkalických fosfatáz Pho15p z patogenních kvasinek Candida albicans a Candida parapsilosis

Autoři: Kročová Eliška | Hrušková-Heidingsfeldová Olga | Kupčík Rudolf | Janovská Sylva | Bílková Zuzana

Rok: 2014

Druh publikace: ostatní - přednáška nebo poster

Strana od-do: nestránkováno

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Produkce a charakterizace predikovaných alkalických fosfatáz Pho15p z patogenních kvasinek Candida albicans a Candida parapsilosis	Záměrem projektu bylo vyrobit standardními molekulárně genetickými technikami rekombinantní proteiny, predikované alkalické fosfatázy, pocházející z kvasinek Candida albicans a Candida parapsilosis. Pomocí afinitní kapalinové chromatografie dané rekombinantní proteiny izolovat a pomocí adekvátních analytických metod získané produkty analyzovat a charakterizovat. Genomy patogenních kvasinek C. albicans a C. parapsilosis byly sekvenovány, anotovány a jsou veřejně přístupné (http://candidagenome.org/). U většiny otevřených čtecích rámců (ORF) však dosud nebylo ověřeno, že skutečně kódují předpokládané proteiny. To platí zejména pro méně zkoumanou C. parapsilosis. Otevřené čtecí rámce orf19.4444 a CPAR2_206650 v těchto kvasinkách pravděpodobně kódují alkalickou fosfatázu Pho15p. Tento předpoklad byl však učiněn jen na základě homologie s genem PHO13 kvasinky Saccharomyces cerevisiae. Proto jsme si dali za cíl ověřit, že je tomu skutečně tak. Na základě podrobné molekulárně biologické analýzy jsme navrhli a pomocí metod genetického inženýrství jsme připravili expresní vektory obsahující ORF pro Pho15p C. albicans a C. parapsilosis, a to tak, že jsme předpokládané kódující sekvence vložili do vektoru pET28b. Zrušili jsme stop kodóny a na 3´konec jsme vložili sekvenci pro histidinovou kotvu (His-tag, sekvence 6 histidinů). Takto vznikly expresní vektory pro fúzní proteiny Pho15p-His-tag. Vnesením expresních vektorů do kmene Escherichia coli BL21(DE3) jsme připravili produkční kmeny E. coli schopné produkovat tyto fúzní proteiny.	rekombinantní proteiny, alkalická fosfatáza, Pho15p, Candida albicans, Candida parapsilosis

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte