Publikace detail

Vývoj magnetického imunosorbentu pro průkaz Salmonella Typhimurium pro mikrofluidní aplikace

Autoři: Srbová Jana | Holubová Lucie | Krulišová Pavla | Bílková Zuzana

Rok: 2015

Druh publikace: ostatní - přednáška nebo poster

Strana od-do: nestránkováno

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Vývoj magnetického imunosorbentu pro průkaz Salmonella Typhimurium pro mikrofluidní aplikace	Dle údajů WHO zemřou každým rokem na celém světě v důsledku alimentárních nákaz 2 miliony lidí. Z nich je zhruba 300 tisíc případů přičítáno úmrtím v důsledku salmonelových infekcí. Pozornost se proto upíná na vývoj nových zařízení pro rychlý průkaz salmonel v potravinách, v našem případě v mléce. Cílem našeho projektu bylo vyvinout novou mikrofluidní platformu založenou na imunomagnetickém záchytu Salmonella s rychlou detekcí celých buněk i jejich DNA pomocí senzoru pracujícího na principu akustických vln (SAW sensor). Stěžejním krokem pro vývoj tohoto zařízení byla příprava magnetického imunosorbentu pro specifický záchyt Salmonella Typhimurium z analyzovaného vzorku. Nejlepší výsledky byly dosaženy s 1 µm magnetickými částicemi Promag 1 Series (Bangs Labs, US) a s polyklonálními anti-Salmonella protilátkami (KPL, US) imobilizovanými na částice pomocí dvoukrokové karbodiimidové konjugační metody. Účinnost imunomagnetické separace byla hodnocena počítáním kolonií po kultivaci imunosorbentu s navázanými buňkami na masopeptonovém agaru při 37 ° C. Připravený imunosorbent byl schopný v modelovém systému ve vsádkovém uspořádání účinnosti záchytu dosahujícího 63-86 % při separaci salmonel z čisté kultury (v závislosti na koncentraci Salmonella ve vzorku 101-105 CFU/mL) a 27-86 % při separaci ze směsné kultury s 10-10 000x přebytkem E. coli vůči Salmonella. Obdobné experimenty byly úspěšně provedeny i s nabohacenými vzorky mléka (nízko-, polo- a plnotučná UHT mléka i pasterovaného mléka). I z takto komplexní matrice byly dosaženy obdobné účinnosti záchytu, dosahující až 88 %. Po důkladné charakterizaci imunosorbentu a ověření účinnosti záchytu salmonel ve vsádkovém uspořádání byly úspěšně provedeny obdobné experimenty v mikrofluidním PDMS čipu na francouzském Institutu Curie. Byla tak ověřena kompatibilita vyvinutého nosiče i použité metody s mikrofluidním uspořádáním. Posledním krokem bude specifický průkaz zachycených bakterií pomocí SAW senzoru.	Salmonella Typhimurium, imunomagnetická separace, mikrofluidním PDMS čip

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte