Publikace detail

Selective isolation of hydrophobin SC3 by solid-phase extraction with polytetrafluoroethylene microparticles and subsequent mass spectrometric analysis

Autoři: Kupčík Rudolf | Zelená Miroslava | Řehulka Pavel | Bílková Zuzana | Česlová Lenka

Rok: 2016

Druh publikace: článek v odborném periodiku

Název zdroje: Journal of Separation Science

Název nakladatele: Wiley-VCH

Místo vydání: Weinheim

Strana od-do: 717-724

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Selektivní izolace hydrofobinu SC3 pomocí extrakce s teflonovými mikročásticemi a následnou hmotnostně spektrometrickou analýzou	Hydrofobiny jsou malé proteiny, které hrají roli v mnoha procesech během růstu a vývoji plísní. Tyto proteiny jsou charakterizovány samoshlukováním jejich molekul na hydrofilních-hydrofobních rozhraních. Izolace a přečištění hydrofobinů představuje obecně velký problém v jejich analýze. Pro tuto práci byl vybrán zástupce hydrofobinů I. třídy hydrophobin SC3 (Schizophyllum commune), který se díky velké hydrofobicitě silně váže na teflonové mikročástice a odolává běžně používaným elučním rozpouštědlům. Této silné vazby bylo využito při jeho selektivní izolaci pomocí vyrobené mikrokolonky naplněné teflonovými částicemi, ze které byl hydrofobin uvolněn elucí za velmi drastických podmínek. Prezentovaný postup izolace může mít pozitivní vliv na další analýzu a použití hydrofobinů I. třídy. Hydrofobin SC3 byl dále podroben redukci jeho vysoce stabilních disulfidických vazem a chymotryptickému štěpení následovanému hmotnostně spektrometrickou analýzou. Postup izolace a štěpení prezentovaný v této práci umožňuje analýzu tohoto vysoce hydrofóbního a kompaktního proteinu.	Hydrofobin SC3; Izolace; hmotnostní spektrometrie; teflonové mikročástice; analýza proteinů
eng	Selective isolation of hydrophobin SC3 by solid-phase extraction with polytetrafluoroethylene microparticles and subsequent mass spectrometric analysis	Hydrophobins are small proteins that play a role in a number of processes during the filamentous fungi growth and development. These proteins are characterized by the self-assembly of their molecules into an amphipathic membrane at hydrophilic-hydrophobic interfaces. Isolation and purification of hydrophobins generally present a challenge in their analysis. Hydrophobin SC3 from Schizophyllum commune was selected as a representative of class I hydrophobins in this work. A novel procedure for selective and effective isolation of hydrophobin SC3 based on solid-phase extraction with polytetrafluoroethylene microparticles loaded in a small self-made microcolumn is reported. The tailored binding of hydrophobins to polytetrafluoroethylene followed by harsh elution conditions resulted in a highly specific isolation of hydrophobin SC3 from the model mixture of ten proteins. The presented isolation protocol can have a positive impact on the analysis and utilization of these proteins including all class I hydrophobins. Hydrophobin SC3 was further subjected to reduction of its highly stable disulfide bonds and to chymotryptic digestion followed by mass spectrometric analysis. The isolation and digestion protocols presented in this work make the analysis of these highly hydrophobic and compact proteins possible.	Hydrophobin SC3; Isolation; Mass spectrometry; Polytetrafluoroethylene microparticles; Protein analysis

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte