Publikace detail

Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Characterization of Gangliosides in Biological Samples

Autoři: Hájek Roman | Jirásko Robert | Lísa Miroslav | Cífková Eva | Holčapek Michal

Rok: 2017

Druh publikace: článek v odborném periodiku

Název zdroje: Analytical Chemistry

Strana od-do: 12425–12432

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Hydrofilní interakce kapalinové chromatografie-hmotnostní spektrometrie pro charakterizaci gangliosidů v biologických vzorcích	Pro identifikaci široké škály gangliosidů v biologických vzorcích byla vyvinuta metoda založená na chromatografii hydrofilních interakcí (HILIC) ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií s ionizací elektrosprejem (ESI-MS/MS). Gangliosidy se skládají ze sfingoidové báze a polárního oligosacharidového řetězce obsahujícího alespoň jednu kyselinu sialovou. Gangliosidy se extrahují směsí chloroformu, methanolu a vody, přičemž horní vodná vrstva obsahující gangliosidy a jiné polární lipidové podtřídy se dále čistí extrakcí C18 v pevné fázi. Optimalizace chromatografických podmínek zahrnuje výběr kolony, složení mobilní fáze, hodnotu pH s cílem dosáhnout nejlepšího chromatografického rozlišení a citlivosti na MS. Identifikace gangliosidů a jiných polárních lipidů je založena na přesných m/z hodnotách iontů [M-H] a iontů fragmentů, měřených MS s vysokým rozlišením. Podrobná interpretace spektra MS/MS umožňuje zobecnění fragmentačních cest, které se pak používají pro diferenciaci gangliosidů řady a, b, c. Strukturní zařazení je dále potvrzeno předpokládaným retenčním chováním v režimu HILIC na základě korelace mezi retencí gangliosidů, počtem sacharidových jednotek a jejich sekvencí. Pro analýzu byly použity vzorky prasečího mozku, lidských ledvin, plic, plazmy a erytrocytů. Použitá metoda HILIC/ESI-MS/MS vede k jednoznačné identifikaci 145 druhů gangliosidů z 19 podtříd, což představuje nejvyšší počet zaznamenaných gangliosidů. Kromě toho bylo v průběhu 15 minut zjištěno 71 sulfatidů a 59 polárních fosfolipidů (fosfatidylserinů, fosfatidylinositolů, lysofosfatidylinositolů a fosfatidylglycerolů).	Gangliosidy; Biologické vzorky; Hydrofilní interakce; Kapalinová chromatografie; Hmotnostní spektrometrie
eng	Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Characterization of Gangliosides in Biological Samples	The hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) coupled to a negative-ion electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS) method has been developed for the identification of a wide range of gangliosides in biological samples. Gangliosides consist of a backbone of sphingoid base and a polar oligosaccharide chain containing at least one sialic acid. Gangliosides are extracted by chloroform-methanol-water mixture, where an upper aqueous layer containing gangliosides and other polar lipid subclasses is further purified by C18 solid-phase extraction. The optimization of chromatographic conditions includes the column selection, mobile-phase composition, pH value, buffer type, and concentration with the goal to achieve the best chromatographic resolution and MS sensitivity. The identification of gangliosides and other polar lipids is based on accurate m/z values of [M-H]- ions and fragment ions as well measured by high-resolution MS. The detailed interpretation of MS/MS spectra enables the generalization of fragmentation pathways, which is then used for the differentiation of a, b, and c series of gangliosides. The structural assignment is further confirmed by agreement with the predicted retention behavior in HILIC mode on the basis of the correlation among the ganglioside retention, the number of saccharide units, and their sequence. The final HILIC/ESI-MS/MS method is applied for the analysis of porcine brain, human kidney, lungs, plasma, and erythrocytes resulting in unambiguous identification of 145 ganglioside species from 19 subclasses, which represents the highest number of reported gangliosides. Moreover, 71 sulfatides and 59 polar phospholipids (phosphatidylserines, phosphatidylinositols, lysophosphatidylinositols, and phosphatidylglycerols) are detected within a 15 min run.	Gangliosides; Biological Samples; Hydrophilic Interaction; Liquid Chromatography; Mass Spectrometry

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte