Univerzita Pardubice Fakulta chemicko- technologická

Univerzita Pardubice

Zaměstnanci
|
Studenti
English

Publikace detail

Advanced immunocapture of milk-borne Salmonella by microfluidic magnetically stabilized fluidized bed

Autoři: Srbová Jana | Krulišová Pavla | Holubová Lucie | Pereiro Iago | Bendali Amel | Hamiot Audrey | Podzemná Veronika | Macák Jan | Dupuy Bruno | Descroix Stephanie | Viovy Jean-Louis | Bílková Zuzana

Rok: 2018

Druh publikace: článek v odborném periodiku

Název zdroje: Electrophoresis

Strana od-do: 526-533

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Imunospecifické vychytávání patogenních bakterií rodu Salmonella v mléce pomocí mikrofluidního systému s magnetem stabilizovaným fluidním ložem	Účinnost vychytávání patogenních bakterií z mléka je silně závislá na kvalitě imunosorbentu, nosiči na bázi superparamagnetických částic, jejichž povrch je biofunkcionalizován specifickými protilátkami. MSFB systém - mikrofluidní separátor s integrovaným magnetem stabilizovaným fluidním ložem byl použit k izolaci a také k namnožení počtu patogenních bakterií pro další analýzu, např. PCR metodu pro průkaz bakteirální DNA. Selekttivita i specificita záchytu je klíčová pro praktické využití analyzátoru, je nutné dosáhnout parametrů, které vyžadují ISO standardy pro průkaz patogenů v potravinách. V práci je popsána biofunkcionalizace magnetických částic a jejich použití pro izolaci patogenů, buněk Salmonella sp. Sledovali jsme účinnost záchytu, výtěžnost, ale i specificitu záchytu, křížová reaktivita nebyla prokázána, míra nespecifické sorpce (směs Salmonella, E. coli) byla pouze 2%.	účinnost záchytu; imunomagnetická separace; mikrofluidní imunospecifické vychytávání; magnetem stabilizoavné mikrofluidní lože; bakterie kontaminující mléko
eng	Advanced immunocapture of milk-borne Salmonella by microfluidic magnetically stabilized fluidized bed	The success of microfluidic immunocapture based on magnetic beads depends primarily on a sophisticated microscale separation system and on the quality of the magnetic immunosorbent. A microfluidic chip containing a magnetically stabilized fluidized bed (MSFB), developed for the capture and on-chip amplification of bacteria, was recently described by Pereiro etal.. The present work shows the thorough development of anti-Salmonella magnetic immunosorbents with the optimal capture efficiency and selectivity. Based on the corresponding ISO standards, these parameters have to be high enough to capture even a few cells of bacteria in a proper aliquot of sample, e.g. milk. The selection of specific anti-Salmonella IgG molecules and the conditions for covalent bonding were the key steps in preparing an immunosorbent of the desired quality. The protocol for immunocapturing was first thoroughly optimized and studied in a batchwise arrangement, and then the carrier was integrated into the MSFB chip. The combination of the unique design of the chip (guaranteeing the collision of cells with magnetic beads) with the advanced immunosorbent led to a Salmonella cell capture efficiency of up to 99%. These high values were achieved repeatedly even in samples of milk differing in fat content. The rate of nonspecific capture of Escherichia coli (i.e. the negative control) was only 2%.	Capture efficiency; Immunomagnetic separation; Microfluidic immunocapture; Microfluidic magnetically stabilized fluidized bed; Milk-borne bacteria