Univerzita Pardubice Fakulta chemicko- technologická

Univerzita Pardubice

Zaměstnanci
|
Studenti
English

Publikace detail

Zlepšení citlivosti pro více tříd lipidů v lidské plazmě chemickou derivatizací

Autoři: Peterka Ondřej | Jirásko Robert | Vaňková Zuzana | Bureš Filip | Holčapek Michal

Rok: 2022

Druh publikace: ostatní - přednáška nebo poster

Strana od-do: nestránkováno

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Zlepšení citlivosti pro více tříd lipidů v lidské plazmě chemickou derivatizací	Charakter funkčních skupin v lipidech má významný vliv na účinnost extrakce, chromatografické chování a citlivost, které lze změnit chemickou derivatizací. Benzoylchlorid není nebezpečný, je běžně dostupný, je to levné derivatizační činidlo s vysokou reaktivitou pro několik funkčních skupin. Derivatizační reakce, retence a fragmentační chování byly zkoumány u 4 nepolárních a 8 polárních lipidových tříd. Produkty byly charakterizovány hmotnostní spektrometrií s vysokým rozlišením a MS/MS. Derivatizační reakce byla důkladně optimalizována pomocí směsné plazmy a molární poměr 4:1 pyridinu s reakcí benzoylchloridu po dobu 60 minut při okolní teplotě zajistil nejlepší výtěžek. Opakovatelnost a reprodukovatelnost zkoumal jeden operátor, resp. dva operátoři, udávající RSD bylo nižší než 20 %. Stabilita derivátů byla pravidelnými měřeními stanovena na nejméně jeden měsíc a pět cyklů mrazení/tání při teplotě -80 °C. Porovnání derivatizačního a nederivatizačního přístupu bylo zkoumáno pomocí kalibračních křivek 22 interních standardů reprezentujících 12 lipidových tříd. Citlivost vyjádřená poměrem kalibračních sklonů byla zvýšena 2 až 10násobně u téměř všech sledovaných lipidových tříd a dokonce více než 100násobně u monoacylglycerolů. Mez detekce byla snížena 9krát u monoacylglycerolů (MG), 6,5krát u sfingoidních bází (SPB) a 3krát u diacylglycerolů (DG). Celkem bylo v lidské plazmě identifikováno 169 benzoylovaných lipidů z 11 tříd pomocí vysoké úrovně spolehlivosti identifikace (přesnost hmotnosti, MS/MS spektra a závislosti na retenčním čase). Metoda derivatizace umožňuje detekci většího množství lipidů pro MG, DG a SPB v porovnání s nederivatizovanými metodami RP-UHPLC/MS.	Derivatizace; lipidy; lidská plazma
eng	Sensitivity Improvement for Multiple Lipid Classes in Human Plasma by Chemical Derivatization	The character of functional groups in lipids has a significantly effect on the extraction efficiency, chromatographic behavior, and sensitivity, which can be changed by chemical derivatization. Benzoyl chloride is a nonhazardous, commonly available, cheap derivatization agent with a high reactivity for several functional groups. Derivatization reaction, retention and fragmentation behavior were investigated for 4 nonpolar and 8 polar lipid classes. The products were characterized by high-resolution mass spectrometry and MS/MS. The derivatization reaction was thoroughly optimized using spiked pooled plasma, and the molar ratio 4:1 of pyridine with benzoyl chloride reacting for 60 min at ambient temperature provided the best yield. The repeatability and reproducibility were investigated by one operator, resp. two operators, reporting RSD lower than 20 %. The stability of the derivatives was determined at least one month and five freeze/thaw cycles stored at -80 °C by periodical measurements. The comparison of the derivatization and non-derivatization approaches were investigated using calibration curves of 22 internal standards representing 12 lipid classes. The sensitivity expressed by the ratio of calibration slopes was increased by 2 to 10-fold for almost all investigated lipid classes and even more than 100-fold for monoacylglycerols. The limit of detection was decreased 9-fold for monoacylglycerols (MG), 6.5-fold for sphingoid base (SPB), and 3-fold for diacylglycerols (DG). In total, 169 benzoylated lipid species from 11 lipid classes were identified in human plasma using the high confidence level of identification (mass accuracy, MS/MS spectra, and retention time dependences). The derivatization method enables detection of more lipid species for MG, DG, and SPB compared with non-derivatized RP-UHPLC/MS methods.	Derivatization; lipids; human plasma