Univerzita PardubiceFakulta chemicko- technologická

Univerzita Pardubice

Zaměstnanci
|
Studenti
English

Publikace detail

HILIC-MS/MS for precise glutathione metabolism profiling

Autoři: Kubát Miroslav | Česla Petr

Rok: 2025

Druh publikace: ostatní - přednáška nebo poster

Strana od-do: nestránkováno

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	HILIC-MS/MS pro přesné profilování metabolismu glutathionu	Hydrofilní interakční chromatografie (HILIC) představuje robustní kapalinově-chromatografickou techniku určenou k separaci polárních, hydrofilních nebo ionizovatelných sloučenin, které vykazují nedostatečnou retenci v chromatografii na reverzní fázi. Zahrnuje biogenní analyt y, jako jsou aminokyseliny, peptidy, cukry, oligosacharidy, nukleotidy, oligonukleotidy, polární metabolity či farmaceutické konjugáty s glutathionem, cysteinem nebo kyselinou glukuronovou. Její bezproblémová integrace s hmotnostní spektrometrií (MS) vychází z ionizovatelných vlastností mnoha polárních sloučenin, které často postrádají chromofory pro účinnou UV detekci, avšak poskytují silné MS signály. Komerčně dostupné HILIC stacionární fáze zahrnují čistý oxid křemičitý, modifikovaný oxid křemičitý, zwitteriontové varianty a hybridní či polymerní materiály se zvýšenou chemickou stabilitou [1]. HILIC se ukazuje jako mimořádně účinná pro cílenou analýzu metabolických a detoxikačních drah glutathionu (GSH). GSH zde vystupuje jako hlavní intracelulární antioxidant, marker oxidačního stresu a biomarker chronických onemocnění včetně diabetes mellitus, cystická fibrózy, osteoartrózy, renálních a jaterních poruch, kardiovaskulárních onemocnění a neurodegenerace. Tato metoda tak umožňuje hlubší porozumění metabolismu, což může podpořit vývoj terapeutických zásahů při intoxikacích a zmírnění symptomů chronických chorob [2]. V této práci byla vyvinuta metoda HPLC-MS/MS využívající kolonu ZIC-HILIC s plně porézními částicemi na systému Agilent 1290 Infinity II LC spojeném s trojitým kvadrupólem Agilent 6475 v elektrosprejové ionizaci (ESI). Optimalizace zahrnovala gradientovou eluci v HILIC režimu a MRM přechody v pozitivním iontovém módu; jako optimální aditivum mobilní fáze pro vyvážení selektivity a citlivosti byla identifikována kyselina difluoroctová v koncentraci 0,05 % (v/v). Příprava vzorku byla optimalizována s využitím 5% kyseliny sulfosalicylové a byla hodnocena z hlediska výtěžnosti ext
eng	HILIC-MS/MS for precise glutathione metabolism profiling	Hydrophilic interaction chromatography (HILIC) serves as a robust liquid chromatographic technique for separating polar, hydrophilic, or ionizable compounds that demonstrate inadequate retention in reversed-phase chromatography, encompassing biogenic analytes such as amino acids, peptides, sugars, oligosaccharides, nucleotides, oligonucleotides, polar metabolites, and pharmaceutical conjugates with glutathione, cysteine, or glucuronic acid. Its seamless integration with mass spectrometry (MS) stems from the ionizable properties of many polar compounds, which typically lack chromophores for effective UV detection but provide strong MS signals; commercially available HILIC stationary phases include bare silica, modified silica, zwitterionic variants, and hybrid or polymer-based materials offering enhanced chemical stability [1]. HILIC proves especially effective for targeted analysis of glutathione (GSH) metabolic and detoxification pathways, where GSH functions as the principal intracellular antioxidant, a marker of oxidative stress, and a biomarker for chronic diseases including diabetes mellitus, cystic fibrosis, osteoarthritis, renal and hepatic disorders, cardiovascular conditions, and neurodegeneration, thereby facilitating deeper insights into metabolism that could enhance therapeutic interventions for intoxications and symptom relief in chronic illnesses [2]. In this work, an HPLC-MS/MS method was developed employing a ZIC-HILIC column with fully porous particles on an Agilent 1290 Infinity II LC system coupled to an Agilent 6475 triple quadrupole MS in electrospray ionization (ESI) mode; optimization involved gradient elution in HILIC mode and multiple reaction monitoring (MRM) transitions in positive ion mode, with 0.05% (v/v) difluoroacetic acid identified as an optimal mobile phase additive to balance selectivity and sensitivity. Sample preparation was optimized using 5% sulfosalicylic acid, assessed for extraction recovery, matrix effect