Zavedení nové laboratorní úlohy "TA cloning a transformace bakterií" do výuky laboratoří C653
Poskytovatel: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy
Program: Interní rozvojová soutěž
Období realizace: 01.01.14 - 31.12.14
Pracoviště:
Fakulta chemicko-technologická - Katedra biologických a biochemických věd
Hlavní řešitel: Pejchalová Marcela
Popis:
Enzym Taq polymeráza používaná pro PCR přidává jeden deoxyadenosin na 3´konce amplikonů. Podstatou TA klonování je ligace těchto PCR produktů do linearizovaného vektoru s kohezními konci (deoxythimidin na 3´koncích). Ligaci lze snadno provést pomocí TA Cloning Kitu. Ligační směs se pak transformuje do kompetentních bakterií Escherichia coli, které se vysejí na vhodné selekční médium. Z narostlých kolonií se vyizoluje plasmidová DNA a pomocí agarózové elektroforézy se zkontroluje začlenění do vektoru.
Enzym Taq polymeráza používaná pro PCR přidává jeden deoxyadenosin na 3´konce amplikonů. Podstatou TA klonování je ligace těchto PCR produktů do linearizovaného vektoru s kohezními konci (deoxythimidin na 3´koncích). Ligaci lze snadno provést pomocí TA Cloning Kitu. Ligační směs se pak transformuje do kompetentních bakterií Escherichia coli, které se vysejí na vhodné selekční médium. Z narostlých kolonií se vyizoluje plasmidová DNA a pomocí agarózové elektroforézy se zkontroluje začlenění do vektoru.
