Publikace detail

Immunomagnetic carriers for microfluidic analytical device to capture and concentrate of Abeta peptides or Tau proteins, the most valid biomarkers of Alzheimer disease

Rok: 2008

Druh publikace: ostatní - přednáška nebo poster

Strana od-do: nestránkováno

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Imunomagnetické nosiče pro mikrofluidní analytické systémy k zachycení a zakoncentrování Abeta peptidů a Tau proteinů, nejvýznamnějších biomarkerů Alzheimerovy choroby	Tento projekt je zaměřen na přípravu vysoce účinných imunosorbentů založených na superparamagnetických mikro/nanočásticích pro magneticky aktivní mikrofluidní zařízení. Tento systém má výhody v uspořádání mikro/nanočástic v kompaktní mikrokolonu s kalibrovanými póry mikronové velikosti [1]. Kombinuje vysokou kapacitu a rychlou afinitní reakci, díky velkému poměru povrchu a objemu a extrémně tenké difúzní vrstvě.Cílem při konstrukci účinných imunosorbentů byla imobilizace protilátek na pevný nosič bez nepříznivého ovlivnění funkce protilátek vázat antigen. Vysoká stérická přístupnost vazebných míst, vysoká operační a skladovací stabilita vazebné aktivity a nízká nespecifická sorpce proteinů byly kritéria hodnocená u nosičů. Karboxylové maghemit-křemenné neporézní mikročástice (SiMAG-Carboxyl, Chemicell, Německo, 1 ?m) a hydrazidové maghemit-křemenné neporézní mikročástice (SiMAG-Hydrazide, Chemicell, Německo, 1 ?m) byly nosiče použité pro imobilizaci králičích polyklonálních IgG proti beta-amyloidu (1-14 AA) nebo králičích polyklonálních IgG proti Tau proteinu (S396). Vazebná účinnost byla přibližně stanovena z rozdílu absorbancí před a po vazbě ([1.55A(280 nm)]-[0.77A(260 nm)]) a pomocí SDS-PAGE. Orientovaně imobilizováno bylo zhruba 15 % celkového množství IgG. Vazebná aktivita a specifita připravených imunosorbentů byly ověřeny pomocí syntetického beta-amyloidového antigenu 1-42 (Apronex, ČR) nebo Tau proteinu (S396) (Abcam, UK). Byl řešen problém s tendencí beta-amyloidového antigenu 1-42 agregovat. 1-3 M urea rozruší nežádoucí precipitáty antigenu a zároveň takto nízká hladina chaotropního činidla v ekvilibračním pufru nebrání vzniku imunokomplexu. Původní vzorky beta-amyloidu a Tau proteinu spolu s elučními frakcemi byly analyzovány elektroforetickou separací Tris-Tricin-SDS-PAGE-urea [2] a MALDI-TOF-MS. Byly připraveny imunosorbenty s anti-Abeta a anti-Tau IgG molekulami orientovaně imobilizovanými na magnetických částicích pro mikročipovou aplikaci.	Abeta peptidy, Tau protein, Alzheimerova choroba, mikrofluidní zařízení, imunomagnetický nosič
eng	Immunomagnetic carriers for microfluidic analytical device to capture and concentrate of Abeta peptides or Tau proteins, the most valid biomarkers of Alzheimer disease	The project aims to prepare the highly effective immunosorbent based on superparamagnetic micro/nanospheres for magnetically active microfluidic device. This system derives benefit from self-organized micro/nanoparticles in compact microcolumn with auto-calibrated micron-sized pores [1]. It combines a high loading capacity and fast affinity reaction, thanks to a high surface to volume ratio and extremely thin diffusion layer. The goal in the construction of an efficient immunosorbent was to immobilize the antibody to the solid-phase support without adversely affecting the antibody?s function to capture antigen. The high steric accessibility of the binding sites, high operational and storage stability of binding activity and low non-specific sorption of protein were the criteria for validation of carrier. Carboxylated maghemite silica non-porous microparticles (SiMAG-Carboxyl, Chemicell, Germany, 1?m) and hydrazide maghemite silica non-porous microparticles (SiMAG-Hydrazide, Chemicell, Germany, 1?m) were carriers utilized for rabbit polyclonal IgG to beta-amyloid (1-14 AA) or rabbit polyclonal IgG to Tau protein (S396) immobilization. Binding efficiency was approximately estimated by difference of absorbances before and after immobilization ([1.55A(280 nm)]-[0.77A(260 nm)] and by SDS-PAGE. About 15 % of total amount of IgG were orientedly immobilized. The binding activity and specificity of prepared immunosorbents were validated by of β-amyloid antigen 1-42, synthetic peptide (Appronex, Czech Republic) or Tau protein (S369), (Abcam, UK). The problem with tendency of β-amyloid antigen 1-42 to aggregate was solved. The 1-3 M Urea disrupts undesired precipitation of antigen; this low level of chaotropic compounds in equilibration buffer does not disturb the immunocomplex. The original samples of β-Amyloid and Tau protein, elution fractions were analyzed by improved electrophoretic separation Tris-Tricin-SDS-PAGE-urea [2] and MALDI-TOF-MS. The immunosorb	Abeta peptides, Tau protein, Alzheimer disease, microfluidic device, immunomagnetic carrier

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte