Publikace detail

Determination of branched-chain amino acids by HPLC with fluorescence detection

Autoři: Kanďár Roman | Žáková Pavla | Sladká Michaela | Kovařík Jakub | Skalický Jiří

Rok: 2008

Druh publikace: článek ve sborníku

Název zdroje: Program a sborník sympozia FONS 2008

Název nakladatele: Stapro s.r.o.

Místo vydání: Pardubice

Strana od-do: 92-93

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem pomocí HPLC s fluorescenční detekcí	Úvod. Stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem (valinu, leucinu a isoleucinu), methioninu, fenylalaninu a tyrosinu je v současnosti nejlepším přístupem k diagnostice choroby javorového sirupu, hypermethioninémie, fenylketonurie a tyrosinémie. Cíl. Cílem této studie bylo vyvinout jednoduchou HPLC metodu pro stanovení Val, Leu, Ile, Met, Phe a Tyr v plazmě dobrovolných dárců krve a krevní skvrně novorozenců. Metody. Byla vyvinuta HPLC metoda pro stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem, Met, Phe a Tyr v plazmě a plné krvi. Vzorky krve, s přídavkem EDTA jako antikoagulační činidlo, byly získány od dobrovolných dárců krve (n = 70, 35 žen ve věku 27-41 let s průměrem 37 let a 35 mužů ve věku 28-43 let s průměrem 38 let). Plazma byla odseparována od krevních buněk pomocí centrifugace (1 700 x g, 15 minut, 8 °C) a poté uchována při ?80 °C. Vzorky krve novorozenců (n = 80, 40 holčiček a 40 chlapečků, ve věku 3 ? 5 dnů) byly odebrány na #903 speciální filtrační papír a nechány schnout nejméně 24 hodin před vlastním měřením. Krevní skvrny byly bezprostředně použity k měření nebo uchovávány při 4 °C. Před HPLC analýzou byly aminokyseliny derivatizovány s o-ftalaldehydem. Pro separaci byla použita kolona LiChroCart 125-4 Purospher RP-18e, 5 um. Efluent byl monitorován pomocí fluorescenčního detektoru. Jako mobilní fáze A byla použita směs 25 mmol/l Na2HPO4-methanol (90:10, v/v), pH 6,5?0,1, mobilní fáze B byl 100% methanol. Výsledky. Analytické parametry metody byly uspokojivé. Variační koeficienty přesnosti v sérii byly pro Val, Leu, Ile, Met, Phe a Tyr v krevní skvrně 3,64%, 3,86%, 2,75%, 3,76%, 2,41% a 5,11% (n = 10) a plazmě 1,38%, 2,22%, 1,36%, 2,77%, 1,65% a 1,78% (n = 10). Variační koeficienty přesnosti mezi sériemi byly 8,31%, 7,22%, 5,91%, 6,11%, 6,94% a 5,97% (n = 12) pro krevní skvrnu, 7,26%, 6,38%, 5,36%, 6,89%, 5,37% a 6,38% (n = 12) pro plazmu. Výtěžnosti byly následující: 101,50% (CV 2,99%), 101,50% (CV 3,45%), 105,75% (CV 1,82%), 105,73% (CV 1,40%),	Aminokyseliny s rozvětveným řetězcem, Choroba javorového sirupu, fenylketonurie, HPLC s fluorescenční detekcí
eng	Determination of branched-chain amino acids by HPLC with fluorescence detection	Background. The determination of branched-chain amino acids (valine, leucine and isoleucine), methionine, phenylalanine and tyrosine is presently the most reliable direct approach to the diagnosis of maple syrup urine disease (MSUD), hypermethioninemia, phenylketonuria (PKU) and tyrosinemia. Aim. The aim of this study was to develop rapid and simple HPLC method for measurement Val, Leu, Ile, Met, Phe and Tyr in plasma of blood donors and dried blood of newborns. Subject and methods. A HPLC method for measurement of branched-chain amino acids, Met, Phe and Tyr in plasma and whole blood has been developed and evaluated. Samples of peripheral venous blood with EDTA as anticoagulant were obtained from a group of healthy blood donors (n = 70, 35 women in the age 27-41 years, mean age 37 years and 35 men in the age 28 43 years, mean age 38 years). Plasma was separated from blood cells by centrifugation (1 700 x g, 15 min, 8 °C) and immediately stored at ?80 °C. Blood-spot samples from a group of newborns (n = 80, 40 baby girls and 40 baby boys, in the age 3 ? 5 days) were collected onto #903 Specimen Collection Paper and allowed to dry for at least 24 h before measurement of the branched-chain keto acids. Spots were immediately used or stored at 4 °C. Before the separation, the amino acids were derivatized with o phthaldialdehyde. For the separation, reverse phase column LiChroCart 125 4 Purospher RP 18e, 5 um, was used. Efluent was monitored with fluorescence detector. The mixture 25 mmol/l Na2HPO4 ? methanol (90:10, v/v), pH 6.5?0.1 was used as mobile phase A and 100% methanol was used as mobile phase B. Results. The analytical performance of this method is satisfactory for determination of all amino acids. The intra assay coefficients of variation for Val, Leu, Ile, Met, Phe and Tyr were 2.64%, 3.86%, 2.75%, 3.67%, 2.41% and 5.11% (n = 10) for dried blood samples, 1.38%, 2.22%, 1.36%, 2.77%, 1.65% and 1.78% (n = 10) for plasma. The inter-assay coefficients of variat	Branched-chain amino acids;Maple syrup urine disease;Phenylketonuria;HPLC with fluorescence detection

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte