Publikace detail

UTILIZATION OF EPITOPE EXTRACTION TECHNIQUE FOR STUDY OF CLINICALLY SIGNIFICANT PEPTIDES

Autoři: Jankovičová Barbora | Rösnerová Šárka | Hubálek Martin | Hernychová Lenka | Bílková Zuzana

Rok: 2007

Druh publikace: článek ve sborníku

Název zdroje: Amino Acids

Název nakladatele: Springer

Strana od-do: 47

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	VYUŽITÍ TECHNIKY EPITOPE EXTRACTION PRO STUDIUM KLINICKY VÝZNAMNÝCH PEPTIDŮ	Technika epitope extraction, založená na kombinaci proteolýzy proteinů s hmotnostně spektrometrickou analýzou otisku prstu získaných peptidů, je dnes jednou z významných technik užívaných k charakterizaci proteinů. Peptidy mohou být identifikovány díky schopnosti protilátek chránit určitou oblast proteinu před proteolýzou více než ostatní. Peptidy představují skupinu klinicky významných látek využívaných ve velké míře v oblasti lékařské diagnostiky a terapie. Identifikace krátkých lineárních peptidových sekvencí odpovídajících hlavním alergogenním epitopům alergenů poskytují perspektivu pro vývoj bezpečných na epitopech založených peptidových vakcín využívaných při řadě alergických přecitlivělostí. Alergogenní epitopy jsou obvykle umístěné na povrchu alergenů a jsou rozpoznávány specifickými molekulami IgE. Nově vyvinuté enzymové (IMERs) a imunoafinitní (IMARs) magnetické mikroreaktory integrované do ?-čipu byly použity pro epitopové mapování modelového potravinového alergenu ovalbuminu. K proteolýze ovalbuminu byly použity magnetické enzymové mikroreaktory s imobilizovaným nativním a/nebo TPCK-trypsinem, pepsinem, α-chymotrypsinem a proteinázou K a následně byly použity magnetické imunoafinitní mikroreaktory s imobilizovanými králičími polyklonálními a/nebo myšími monoklonálními anti-ovalbuminovými protilátkami pro zachycení alergogenních epitopů ze směsi peptidových fragmentů. Peptidové frakce eluované z imunosorbentu byly bez další purifikace analyzovány pomocí MALDI-TOF-MS a tandemovou hmotnostně spektrometrickou sekvenací na přístroji QTOF Ultima API (Waters, UK) byla potvrzena peptidová sekvence (KIKVYLPR, M/z 1016.6615). Fragmentační spektrum daného peptidu bylo porovnáno s teoretickým spektrem studované sekvence s použitím PepSeq zápisu v MassLynx 4.0 (Waters, UK) a byla nalezena velmi dobrá shoda. Využití techniky ?epitope extraction? v ?-čipovém uspořádání má řadu výhod a představuje účinný nástroj k rychlé a jednoduché izolaci epitopů s imunogenním	epitopová extrakce; alergogenní epitopy
eng	UTILIZATION OF EPITOPE EXTRACTION TECHNIQUE FOR STUDY OF CLINICALLY SIGNIFICANT PEPTIDES	Today, epitope extraction, based on combination of protein proteolysis with peptide finger-print mass spectrometric analysis, is one of the powerful techniques used for protein characterization. Peptides can be identified by the ability of the antibody to protect one region of the protein more than others from proteolysis. Peptides represent clinically significant group of substances applied in large measure in the field of medical diagnostic and therapy. Identification of short linear peptide sequences in accordance with main allergogenic epitopes of the whole allergens provides the future of safe epitope-based peptide vaccines for a wide range of allergic sensitizations. Allergogenic epitopes are usually located at the surface of allergens and they are recognized by specific IgE molecules. New developed enzyme (IMERs) and immunoaffinity (IMARs) magnetic microreactors integrated into ?-chip were used for epitope mapping of model food allergen ovalbumin. Magnetic enzyme microreactors with immobilized native and/or TPCK-trypsin, pepsin, α-chymotrypsin and proteinase K were utilized for proteolysis of ovalbumin and subsequently the magnetic immunoaffinity microreactors with immobilized rabbit polyclonal and/or mouse monoclonal anti-ovalbumin antibodies were utilized for capturing of allergogenic epitopes from the mixture of peptide fragments. The peptide fractions eluted from immunosorbent were analyzed by MALDI-TOF-MS without further purification and peptide sequence (KIKVYLPR, M/z 1016.6615) was confirmed by tandem mass spectrometric sequencing on QTOF Ultima API (Waters, UK). The fragmentation pattern of the peptide was compared to theoretical pattern of the studied sequence using PepSeq script in MassLynx 4.0 (Waters, UK) and very good match was found. The utilization of chip-based epitope extraction technique has a plenty of advantages and provides the proper tool for rapid and simple isolation of epitopes with immunogenic potential.	epitope extraction; allergogenic epitopes

Search

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte