Publikace detail

Electrophoretic separation of amyloid beta peptides

Autoři: Zdražilová Pavla | Holub Dušan | Bílková Zuzana

Rok: 2007

Druh publikace: článek ve sborníku

Název zdroje: Amino Acids

Název nakladatele: Springer

Strana od-do: LII

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Elektroforetická separace beta amyloidových peptidů	Hlavní proteinovou součástí amyloidových plaků nacházených v mozcích pacientů s Alzheimerovou chorobou je peptid amyloid-β (Aβ or βA4). b-amyloidové peptidy (o molekulové hmotnosti kolem 4,5 kDa) mají přibližně 42 aminokyselinových zbytků. Ukládání a agregace těchto peptidů je považována za důležitý patologický jev pro vznik senilních plaků. Hladiny peptidů Aβ a proteinu tau v mozkomíšním moku a/nebo plasmě splňují kritéria pro spolehlivé testování intra vitam a patří mezi biomarkery podporující diagnostiku Alzheimerovy choroby. Běžně využívané systémy SDS-PAGE nejsou vhodné pro rozlišení A peptidů lišících se pouze o jeden či dva aminokyselinové zbytky v délce peptidového řetězce. Proto byly testovány i další elektroforetické techniky z hlediska jejich užitečnosti pro separaci A peptidů Aβ(1-38), Aβ(1-40) and Aβ(1-42). Základním zvoleným systémem byla Tris-Tricin SDS-PAGE, dále SDS-PAGE s ureou a kyselinou octovou (HAc) jako denaturujícími činidly. Použita byla také bicin/bis-tris/Tris/sulfátová SDS-PAG, kde je vysoká rozlišovací schopnost dosažena pomocí přidání 8M urey do separačního gelu a použitím zmíněného diskontinuálního pufru. Všechny experimenty byly prováděny s využitím systému Mini PROTEAN 3 (BioRAD) a gely byly následně barveny pomocí Coomassie Brilliant blue R-250 či technikou amoniakálního stříbra. Rozlišení jednotlivých peptidů pomocí HAc-Urea SDS-PAGE nebylo pro naše účely dostačující. Ověřili jsme, že elektroforetická separace Ab peptidů je proveditelná pomocí mulitfázové bicin/bis-tris-Tris/SDS-PAGE s gely obsahujícími 8M ureu. Všechny peptidy se rozdělily do ostrých bandů a také za těchto podmínek dokonce delší peptidy putují v gelu rychleji než peptidy o délce 38 či 40 aminokyselin. Dobré rozdělení bylo dosaženo i pomocí Tris-Tricinového systému SDS-PAGe, zde ale byly peptidové bandy mírně deformované a rozmyté.	amyloid beta; SDS-PAGE; Alzheimerova choroba
eng	Electrophoretic separation of amyloid beta peptides	The main protein component of the amyloid deposits found in the brains of Alzheimer´s disease patients is a peptide termed amyloid-β (Aβ or βA4). The amyloid-β peptides (molecular weight about 4,5 kDa) are approximately 42-amino acid residue peptides. Peptides deposition and aggregation are thought to be important pathological events in the formation of Alzheimer´s disease plaque. The concentrations of Aβ peptides and tau protein(s) in cerebrospinal fluid and/or blood belong to the candidate biomarkers supporting diagnose of Alzheimer?s disease and they have been proven to fulfill the criteria for good diagnostic tests intra vitam. Conventional SDS-PAGE system is not suited for separating of amyloid-β peptides Aβ(1-38), Aβ(1-40) and Aβ(1-42). Alternative electrophoretic techniques have been compared for their usefulness in separation analysis of peptides corresponding to amino acids (1-38), (1-40) and (1- 42) of the amyloid-β sequence. The first system is the fundamental Tris-Tricine electrophoresis, while the second one employs acetic-urea-polyacrylamide gel electrophoresis denaturing system. We have also applied the urea version of the bicine/bis-tris/Tris/sulfate SDS-PAGE to separate Aβ peptides. Here the clear resolution was achieved by addition of 8M urea to the separation gel and use aforementioned multiphasic buffer. All electrophoreses procedures were performed using the Bio-RAD Mini PROTEAN 3 electrophoresis gel system and gels were stained using Coomassie Brilliant blue R-250 or by silver staining. The separation by means of acetic-urea-PAGE was not sufficient enough. We proved that electrophoretic separation of these peptides is practicable by the bicine/Tris/SDS-PAGE system with the separation gels containing 8M urea. Under these conditions the longer peptide migrated faster than the one ending at amino acid 38 or 40. All peptides are resolved as cleraly separated sharp bands, even on minig	amyloid beta peptide; SDS-PAGE; Alzheimer´s disease

Vyhledávání

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte