Univerzita PardubiceFakulta chemicko- technologická

Univerzita Pardubice

Zaměstnanci
|
Studenti
English

Publikace detail

Imobilizácia acetylcholinesterasy na povrch elektrochemického senzoru

Autoři: Vorčáková Katarína | Štěpánková Šárka

Rok: 2012

Druh publikace: ostatní - přednáška nebo poster

Strana od-do: nestránkováno

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
slo	Imobilizácia acetylcholinesterasy na povrch elektrochemického senzoru	Acetylcholinesterasa (ACHE, EC 3.1.1.7) je hydrolytický enzým, ktorého primárnou úlohou je rýchla eliminácia neurotransmiteru acetylcholinu v presynaptickej štrbine za vzniku cholinu a kyseliny octovej [1]. Stanovenie aktivity tohto enzýmu zohráva dôležitú úlohu v etiológii viacerých ochorení, ako sú napr. Alzheimerová choroba, kedy je jej hodnota značne zvýšená [2]. Cieľom našej práce bolo testovanie rôznej aktivity ACHE v reakčnej zmesi (0,14 U/ml, 0,5 U/ml a 1U/ml) za použitia elektrochemického senzoru (Pt/AgPd/Pt). Na povrch senzoru bol enzým imobilizovaný dvoma technikami: adsorpcia (podľa testovanej aktivity bolo X μl enzýmu nanesených na povrch senzoru) a zosieťovanie glutaraldehydom (zo zmesi 1 ml ACHE, 1 mg BSA, 30 μl glutaraldehydu bol nanesený objem X μl podľa testovanej aktivity) . Výsledný objem reakčnej zmesi pre obe imobilizačné metódy bol 550 μl a všetky merania prebiehali v prostredí PBS. V ďalšej časti bola s použitím imobilizovaného senzoru testovaná rôzna koncentrácia substrátu (acetylthiocholin) v reakčnej zmesi. Koncentračný interval sa pohyboval v rozmedzí 10-2-10-5 M a bol testovaný pre všetky vyššie uvedené aktivity enzýmu. Na detekciu oxidačného produktu thiocholinu bola použitá square-wave voltametria (SWV). Záver Sériou meraní bola za najvhodnejšiu koncentráciu substrátu zvolená hodnota 1.10-3 M a bolo zistené, že pri aktivite 0,5 U prebiehala enzymatická reakcia najlepšie. Pre obe imobilizačné techniky boli z nameraných dát vypočítané hodnoty Michaelisovej konštanty (Km) a medzná rýchlosť (Vm). Bolo zistené, že imobilizácia nemá vplyv na hodnoty Km (pred: Km= 2,44510-2 M, po (adsorpcia): Km= 2,410-2 M, (glutaraldehyd): Km= 2,38*10-2 M). Naopak, u Vm dochádzalo k zmene, konkrétne k znižovaniu hodnoty (pred: Vm= 21,18 μA po (adsorpcia): Vm= 12,755 μA, (glutaraldehyd): Vm= 12,53 μA). Vyššie uvedené hodnoty boli získané pri testovaní enzýmovej aktivity 0,5 U.	acetylcholinesterasa, imobilizácia, sensor