Publikace detail

Selektivní izolace hydrofobinu SC3 a jeho následná proteomická analýza

Autoři: Zelená Miroslava | Kupčík Rudolf | Řehulka Pavel | Bílková Zuzana | Česlová Lenka

Rok: 2017

Druh publikace: ostatní - přednáška nebo poster

Strana od-do: nestránkováno

Tituly:

Jazyk	Název	Abstrakt	Klíčová slova
cze	Selektivní izolace hydrofobinu SC3 a jeho následná proteomická analýza	Hydrofobiny jsou malé proteiny, obsahující typický vzor osmi cysteinů, které jsou propojené čtyřmi disulfidickými můstky. Vykazují výraznou povrchovou aktivitu a schopnost samoshluknutí na různých typech rozhraní.V této práci byla vyvinuta nová metoda pro izolaci hydrofobinu SC3 (Schizophyllum commune), využívající vysokou hydrofobicitu těchto proteinů a silnou afinitu k teflonu jako adsorpčnímu činidlu. Pomocí teflonových mikročástic byl selektivně izolován hydrofobin SC3 z modelových směsí proteinů. Tato technika je velmi efektivní, časově nenáročná a představuje velký potenciál pro izolaci hydrofobinů z reálných vzorků. Účinnost izolace hydrofobinů byla ověřena pomocí tricinové SDS-PAGE. Identifikace hydrofobinu SC3 byla provedena pomocí MALDI-MS s využitím dvou typů analyzátorů – analyzátor doby letu (TOF) a orbitální past (Orbitrap). Pro analýzu na MALDI-TOF/TOF hmotnostním spektrometru byl použit intaktní hydrofobin, ale před analýzou na peptidové úrovni pomocí MALDI-Orbitrap bylo nutné protein nejprve enzymaticky naštěpit. Na základě obsahu aminokyselin v primární struktuře analyzovaného proteinu bylo enzymatické štěpení provedeno pomocí chymotrypsinu a thermolysinu. Úspěšnost štěpení je podmíněna efektivní redukcí a alkylací disulfidických můstků, jelikož hydrofobiny jsou jimi vysoce stabilizované. Pro redukci bylo použito redukční činidlo Tris(2-karboxyethyl)fosfinhydrochlorid v kombinaci s hydrochloridem guanidinu nebo deoxycholátem sodným s následnou alkylací jodoacetamidem. Úspěšnost enzymatického štěpení byla ověřena pomocí tricinové SDS-PAGE. Vzniklé peptidy byly analyzovány pomocí MALDI-MS.	hydrofobiny, hmotnostní spektrometrie, proteomická analýza

Search

Přihlášení pro studenty

Přihlášení pro zaměstnance

Publikace detail

Katedry

Ústavy a pracoviště

Jak nás najdete?

Služby

Často hledáte